CAJ | 학술논문

目的:观察STZ鼠肾组织及高糖状态下正常人类系膜细胞(NHMC)中金属基质蛋白酶9(MMP-9)、金属基质蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达状况及磷酸肌酸激酶(PKC)抑制剂对其表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)时PKC抑制剂在细胞外基质降解中的作用. 方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、DN模型组、PKC抑制剂组.PKC抑制剂组采用根皮素10 mg/(kg·d)混悬液灌胃进行干预.第8周处死大鼠(每组6只).检测24h尿蛋白定量、血肌酐水平.用免疫组化方法检测肾脏组织MMP-9、TIMP-1的表达.用ELISA方法检测肾脏组织PKC活性.体外实验,将NHMC置37℃,5%CO2培养箱中进行培养.并将NHMC分为N组(对照组):糖浓度5 mmol/L, H组(高糖组):糖浓度30 mmol/L, P组(高糖加PKC抑制剂):糖浓度30 mmol/L加 chelery thrine chloride 10-5mmol/L, M组(甘露醇组):甘露醇30 mmol/L.于培养24、48、72 h后用MTT法测定细胞增值.采用ELISA方法检测四组PKC活性.分别用RT-PCR及Western Blot检测各组MMP-9、TIMP-1mRNA及蛋白表达. 结果:DN模型组尿蛋白排泄明显增加(P＜0.01),血肌酐上升(P＜0.05),PKC活性明显增高,MMP-9和TIMP-1出现表达,MMP-9/TIMP-1比值降低.PKC抑制剂干预后其尿蛋白排泄明显减少,血肌酐水平降低,PKC活性下降,MMP-9、TIMP-1表达上调,其MMP-9/TIMP-1比值增高.体外实验中,高糖能促进NHMC增殖,且NHMC的增殖状况随时间的递增而明显增加.高糖(30 mmol/L)能增加系膜细胞PKC的活性,MMP-9、TIMP-1较高表达,MMP-9/TIMP-1比值降低.而PKC抑制剂使PKC的活性降低同时,MMP-9、TIMP-1表达上调,MMP-9/TIMP-1比值增高. 结论:高糖可诱导PKC活性,PKC抑制剂能使MMP-9、TIMP-1表达上调,MMP-9/TIMP-1表达比值升高,推测PKC的活性状况可影响DN细胞外基质降解过程.
목적:관찰STZ서신조직급고당상태하정상인류계막세포(NHMC)중금속기질단백매9(MMP-9)、금속기질단백매조직억제물1(TIMP-1)표체상황급린산기산격매(PKC)억제제대기표체적영향,탐토당뇨병신병(DN)시PKC억제제재세포외기질강해중적작용. 방법:Wistar대서수궤분위정상대조조、DN모형조、PKC억제제조.PKC억제제조채용근피소10 mg/(kg·d)혼현액관위진행간예.제8주처사대서(매조6지).검측24h뇨단백정량、혈기항수평.용면역조화방법검측신장조직MMP-9、TIMP-1적표체.용ELISA방법검측신장조직PKC활성.체외실험,장NHMC치37℃,5%CO2배양상중진행배양.병장NHMC분위N조(대조조):당농도5 mmol/L, H조(고당조):당농도30 mmol/L, P조(고당가PKC억제제):당농도30 mmol/L가 chelery thrine chloride 10-5mmol/L, M조(감로순조):감로순30 mmol/L.우배양24、48、72 h후용MTT법측정세포증치.채용ELISA방법검측사조PKC활성.분별용RT-PCR급Western Blot검측각조MMP-9、TIMP-1mRNA급단백표체. 결과:DN모형조뇨단백배설명현증가(P＜0.01),혈기항상승(P＜0.05),PKC활성명현증고,MMP-9화TIMP-1출현표체,MMP-9/TIMP-1비치강저.PKC억제제간예후기뇨단백배설명현감소,혈기항수평강저,PKC활성하강,MMP-9、TIMP-1표체상조,기MMP-9/TIMP-1비치증고.체외실험중,고당능촉진NHMC증식,차NHMC적증식상황수시간적체증이명현증가.고당(30 mmol/L)능증가계막세포PKC적활성,MMP-9、TIMP-1교고표체,MMP-9/TIMP-1비치강저.이PKC억제제사PKC적활성강저동시,MMP-9、TIMP-1표체상조,MMP-9/TIMP-1비치증고. 결론:고당가유도PKC활성,PKC억제제능사MMP-9、TIMP-1표체상조,MMP-9/TIMP-1표체비치승고,추측PKC적활성상황가영향DN세포외기질강해과정.