中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2008年
2期
158-162
,共5页
汤兆明%胡丽华%李一荣%窦丽芳%熊娟
湯兆明%鬍麗華%李一榮%竇麗芳%熊娟
탕조명%호려화%리일영%두려방%웅연
血型A抗原%模拟多肽%融合蛋白%诊断
血型A抗原%模擬多肽%融閤蛋白%診斷
혈형A항원%모의다태%융합단백%진단
目的 融合表达血型A抗原的模拟多肽,初步鉴定融合蛋白结合抗A抗体的能力.方法 PCR克隆扩增血型A抗原模拟多肽(P5)和谷胱苷肽S转移酶(GST)编码基因,并连接成P5-GST.双酶切后克隆入原核表达质粒pET28b,经E.coli DH5a扩增后纯化并酶切、测序鉴定.以BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下表达P5-GST融合蛋白.Ni-NTA柱纯化蛋白.红细胞凝集抑制实验分析融合蛋白模拟血型A抗原的能力.ABO-ELISA初步分析P5-GST融合蛋白检测血型抗体的效能.结果 成功构建P5基因和GST基因融合的原核表达质粒pET28b-P5-GST,目的基因可以高效表达,纯化的融合蛋白具有良好的模拟血型A抗原的能力.基于P5-GST融合蛋白的ABO-ELISA具有一定的检测血浆抗A抗体的能力.结论 血型A抗原的模拟多肽序列与GST的融合表达蛋白具有特异性结合抗A抗体的特性,本融合蛋白具有替代血型A多糖抗原潜能,为发展新型的抗A抗体检测方法提供依据.
目的 融閤錶達血型A抗原的模擬多肽,初步鑒定融閤蛋白結閤抗A抗體的能力.方法 PCR剋隆擴增血型A抗原模擬多肽(P5)和穀胱苷肽S轉移酶(GST)編碼基因,併連接成P5-GST.雙酶切後剋隆入原覈錶達質粒pET28b,經E.coli DH5a擴增後純化併酶切、測序鑒定.以BL21(DE3)為錶達菌,在IPTG誘導下錶達P5-GST融閤蛋白.Ni-NTA柱純化蛋白.紅細胞凝集抑製實驗分析融閤蛋白模擬血型A抗原的能力.ABO-ELISA初步分析P5-GST融閤蛋白檢測血型抗體的效能.結果 成功構建P5基因和GST基因融閤的原覈錶達質粒pET28b-P5-GST,目的基因可以高效錶達,純化的融閤蛋白具有良好的模擬血型A抗原的能力.基于P5-GST融閤蛋白的ABO-ELISA具有一定的檢測血漿抗A抗體的能力.結論 血型A抗原的模擬多肽序列與GST的融閤錶達蛋白具有特異性結閤抗A抗體的特性,本融閤蛋白具有替代血型A多糖抗原潛能,為髮展新型的抗A抗體檢測方法提供依據.
목적 융합표체혈형A항원적모의다태,초보감정융합단백결합항A항체적능력.방법 PCR극륭확증혈형A항원모의다태(P5)화곡광감태S전이매(GST)편마기인,병련접성P5-GST.쌍매절후극륭입원핵표체질립pET28b,경E.coli DH5a확증후순화병매절、측서감정.이BL21(DE3)위표체균,재IPTG유도하표체P5-GST융합단백.Ni-NTA주순화단백.홍세포응집억제실험분석융합단백모의혈형A항원적능력.ABO-ELISA초보분석P5-GST융합단백검측혈형항체적효능.결과 성공구건P5기인화GST기인융합적원핵표체질립pET28b-P5-GST,목적기인가이고효표체,순화적융합단백구유량호적모의혈형A항원적능력.기우P5-GST융합단백적ABO-ELISA구유일정적검측혈장항A항체적능력.결론 혈형A항원적모의다태서렬여GST적융합표체단백구유특이성결합항A항체적특성,본융합단백구유체대혈형A다당항원잠능,위발전신형적항A항체검측방법제공의거.
