CAJ | 학술논문

[目的]金黄色葡萄球菌作为一种分布广泛的致病微生物和研究革兰氏阳性菌遗传背景的模式菌株,利用real-time RT PCR对相关毒素及调控基因进行表达定量分析,在生物、医学、食品检测等领域具有较大研究价值.[方法]对制备好的反转录(RT,含有cDNA和DNA)和非反转录(RTˉ,仅含DNA)样品进行Real-time PCR检测,根据经典(1+E)ˉ△△Ct相对定量算法并结合PCR效率公式建立一种基因表达相对定量分析的DNA扣除法,将得到的Ct值转换为各样品含量,从RT样品中扣除RTˉ样品的量,无需DNaseⅠ酶解处理就可以去除DNA的影响,RTˉ样品的检测结果还可同时作为稳定的DNA内参.[结果]采用以上方法分析金黄色葡萄球菌肠毒素A基因(sea)、16S rRNA和RNA Ⅲ的表达情况,在含有葡萄糖的NB培养基中sea的相对转录水平随着葡萄糖浓度的增大而升高,RNAⅢ的相对转录水平随葡萄糖浓度的变化而产生小幅度的波动,16S rRNA在菌体生长初期时的表达量较为稳定;与绝对定量法比较,结果差异较小(均小于15%),且差异不显著(p＞0.05).[结论]这种基于DNA扣除法的Real-time RT PCR相对定量方法可以有效的对金黄色葡萄球菌的基因表达进行分析.
[목적]금황색포도구균작위일충분포엄범적치병미생물화연구혁란씨양성균유전배경적모식균주,이용real-time RT PCR대상관독소급조공기인진행표체정량분석,재생물、의학、식품검측등영역구유교대연구개치.[방법]대제비호적반전록(RT,함유cDNA화DNA)화비반전록(RTˉ,부함DNA)양품진행Real-time PCR검측,근거경전(1+E)ˉ△△Ct상대정량산법병결합PCR효솔공식건립일충기인표체상대정량분석적DNA구제법,장득도적Ct치전환위각양품함량,종RT양품중구제RTˉ양품적량,무수DNaseⅠ매해처리취가이거제DNA적영향,RTˉ양품적검측결과환가동시작위은정적DNA내삼.[결과]채용이상방법분석금황색포도구균장독소A기인(sea)、16S rRNA화RNA Ⅲ적표체정황,재함유포도당적NB배양기중sea적상대전록수평수착포도당농도적증대이승고,RNAⅢ적상대전록수평수포도당농도적변화이산생소폭도적파동,16S rRNA재균체생장초기시적표체량교위은정;여절대정량법비교,결과차이교소(균소우15%),차차이불현저(p＞0.05).[결론]저충기우DNA구제법적Real-time RT PCR상대정량방법가이유효적대금황색포도구균적기인표체진행분석.