中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2009年
2期
165-172
,共8页
黑龙江野鲤%细菌人工染色体(BAC)%基因组文库%超级池
黑龍江野鯉%細菌人工染色體(BAC)%基因組文庫%超級池
흑룡강야리%세균인공염색체(BAC)%기인조문고%초급지
为了开展鲤基因组研究,深入研究遗传连锁图谱遗传标记的定位及数量性状的定位和克隆,并最终为分子育种提供服务,本实验构建了鲤的BAC基因组文库.通过采集黑龙江野鲤(Cyprinus caxpio haematopterus)全血细胞制备琼脂糖凝胶包埋块的方法获得了高分子量(HMW)DNA.通过BamHI部分酶切和PFGE电泳分离选择获得1130～300 kb的DNA片段,用电洗脱和透析的方法对产物进行浓缩和纯化.纯化的HMW DNA连接到大小为7.2 kh的克隆载体pEZ BAC上.为了评估构建的文库的质量使用一系列引物对文库进行了验证.本研究首次构建黑龙江野鲤的BAC文库,该库含有46656个克隆,插入片段大小在50～300 kh之间,平均大小在100 kb左右,覆盖鲤全基因组2.45倍,调取任一基因的概率为90070左右.获得的BAC克隆,保存在378块96孔板和27块384孔板中.建立了高效稳定的2步3维PCR筛选黑龙江野鲤BAC文库的方法.本实验为今后进一步进行鲤的功能基因定位及染色体步行、BAC-FLSH等研究工作打下重要基础.
為瞭開展鯉基因組研究,深入研究遺傳連鎖圖譜遺傳標記的定位及數量性狀的定位和剋隆,併最終為分子育種提供服務,本實驗構建瞭鯉的BAC基因組文庫.通過採集黑龍江野鯉(Cyprinus caxpio haematopterus)全血細胞製備瓊脂糖凝膠包埋塊的方法穫得瞭高分子量(HMW)DNA.通過BamHI部分酶切和PFGE電泳分離選擇穫得1130～300 kb的DNA片段,用電洗脫和透析的方法對產物進行濃縮和純化.純化的HMW DNA連接到大小為7.2 kh的剋隆載體pEZ BAC上.為瞭評估構建的文庫的質量使用一繫列引物對文庫進行瞭驗證.本研究首次構建黑龍江野鯉的BAC文庫,該庫含有46656箇剋隆,插入片段大小在50～300 kh之間,平均大小在100 kb左右,覆蓋鯉全基因組2.45倍,調取任一基因的概率為90070左右.穫得的BAC剋隆,保存在378塊96孔闆和27塊384孔闆中.建立瞭高效穩定的2步3維PCR篩選黑龍江野鯉BAC文庫的方法.本實驗為今後進一步進行鯉的功能基因定位及染色體步行、BAC-FLSH等研究工作打下重要基礎.
위료개전리기인조연구,심입연구유전련쇄도보유전표기적정위급수량성상적정위화극륭,병최종위분자육충제공복무,본실험구건료리적BAC기인조문고.통과채집흑룡강야리(Cyprinus caxpio haematopterus)전혈세포제비경지당응효포매괴적방법획득료고분자량(HMW)DNA.통과BamHI부분매절화PFGE전영분리선택획득1130～300 kb적DNA편단,용전세탈화투석적방법대산물진행농축화순화.순화적HMW DNA련접도대소위7.2 kh적극륭재체pEZ BAC상.위료평고구건적문고적질량사용일계렬인물대문고진행료험증.본연구수차구건흑룡강야리적BAC문고,해고함유46656개극륭,삽입편단대소재50～300 kh지간,평균대소재100 kb좌우,복개리전기인조2.45배,조취임일기인적개솔위90070좌우.획득적BAC극륭,보존재378괴96공판화27괴384공판중.건립료고효은정적2보3유PCR사선흑룡강야리BAC문고적방법.본실험위금후진일보진행리적공능기인정위급염색체보행、BAC-FLSH등연구공작타하중요기출.
