CAJ | 학술논문

目的:探讨用RNAi干扰技术下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)对缺氧损伤引起的神经元NR2B受体表达调控机制.方法:建立海马神经元培养缺氧缺糖(Oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤模型,转染shRNAspten-GFP质粒,采用细胞比色分析(Colorimetric assay)法观察神经元膜表面NR2B含量,RT-PCR测定NR2B受体的mRNA的表达,采用Fura 2-AM法测定胞内Ca2+浓度,AlamarBlue进行神经元活力分析.结果:shRNAspten-GFP能成功转染到神经元中;细胞比色法显示神经元膜表面有大量NR2B表达,与PshGFP对照组相比shRNAspten治疗组NR2B含量明显降低(P＞0.05),RT-PCR测定结果与细胞比色法结果基本一致;OGD损伤组比正常组胞内Ca2+浓度显著升高(P＜0.05),转染PTEN基因后胞内Ca2+浓度比PshGFP对照组明显降低(P＜0.05);无关对照PshGFP组神经元活力较正常对照组和治疗组均有显著下降(P＜0.05) o结论:下调PTEN基因可降低NR2B的表达,阻断Ca2+内流,增加细胞活力,从而保护神经元损伤.
목적:탐토용RNAi간우기술하조제10호염색체동원주실성린산매장력단백기인(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)대결양손상인기적신경원NR2B수체표체조공궤제.방법:건립해마신경원배양결양결당(Oxygen-glucose deprivation,OGD)손상모형,전염shRNAspten-GFP질립,채용세포비색분석(Colorimetric assay)법관찰신경원막표면NR2B함량,RT-PCR측정NR2B수체적mRNA적표체,채용Fura 2-AM법측정포내Ca2+농도,AlamarBlue진행신경원활력분석.결과:shRNAspten-GFP능성공전염도신경원중;세포비색법현시신경원막표면유대량NR2B표체,여PshGFP대조조상비shRNAspten치료조NR2B함량명현강저(P＞0.05),RT-PCR측정결과여세포비색법결과기본일치;OGD손상조비정상조포내Ca2+농도현저승고(P＜0.05),전염PTEN기인후포내Ca2+농도비PshGFP대조조명현강저(P＜0.05);무관대조PshGFP조신경원활력교정상대조조화치료조균유현저하강(P＜0.05) o결론:하조PTEN기인가강저NR2B적표체,조단Ca2+내류,증가세포활력,종이보호신경원손상.