解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2010年
6期
876-879
,共4页
黎晓莉%王璐%吴宏%张雁%关雪晶%姜蓉
黎曉莉%王璐%吳宏%張雁%關雪晶%薑蓉
려효리%왕로%오굉%장안%관설정%강용
包皮成纤维细胞%胚胎生殖细胞%饲养层%酶联免疫吸附测定-双抗夹心法%免疫组织化学%反转录-聚合酶链式反应%人
包皮成纖維細胞%胚胎生殖細胞%飼養層%酶聯免疫吸附測定-雙抗夾心法%免疫組織化學%反轉錄-聚閤酶鏈式反應%人
포피성섬유세포%배태생식세포%사양층%매련면역흡부측정-쌍항협심법%면역조직화학%반전록-취합매련식반응%인
目的 以人包皮成纤维细胞为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞,观察饲养层对其生长的影响,并对人胚胎生殖细胞进行鉴定.方法 分离培养4～5岁小儿包皮成纤维细胞,取P3～P30代细胞用丝裂霉素灭活后铺板备用,酶联免疫吸附测定(ELISA)-双抗夹心法检测其分泌物成纤维细胞生长因子(FGF)的含量;分离培养5～11周人胚胎原始生殖细胞,在不添加任何细胞因子的人包皮成纤维细胞饲养层上培养人胚胎生殖细胞;细胞化学法检测人胚胎生殖细胞碱性磷酸酶的活性,免疫细胞化学法检测其胚胎表面特异性抗原SSEA-1及SSEA-4的表达,RT-PCR法检测Oct-4的表达.结果 包皮成纤维细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;P3～P30代包皮成纤维细胞上清液中FGF含量在(172.09±2.66)pg/L～(245.25±1.66)pg/L之间波动.分离培养的人胚胎生殖细胞在饲养层上可形成典型的胚胎生殖细胞集落,体外连续培养超过3代,其碱性磷酸酶活性呈强阳性,集落未分化标志检测显示SSEA-l、SSEA-4呈阳性,Oct-4表达阳性.结论 用人包皮成纤维细胞作为饲养层能支持人胚胎生殖细胞的生长并维持未分化状态.
目的 以人包皮成纖維細胞為飼養層體外培養人胚胎生殖細胞,觀察飼養層對其生長的影響,併對人胚胎生殖細胞進行鑒定.方法 分離培養4～5歲小兒包皮成纖維細胞,取P3～P30代細胞用絲裂黴素滅活後鋪闆備用,酶聯免疫吸附測定(ELISA)-雙抗夾心法檢測其分泌物成纖維細胞生長因子(FGF)的含量;分離培養5～11週人胚胎原始生殖細胞,在不添加任何細胞因子的人包皮成纖維細胞飼養層上培養人胚胎生殖細胞;細胞化學法檢測人胚胎生殖細胞堿性燐痠酶的活性,免疫細胞化學法檢測其胚胎錶麵特異性抗原SSEA-1及SSEA-4的錶達,RT-PCR法檢測Oct-4的錶達.結果 包皮成纖維細胞可以傳60代以上,P3～P30代均適宜作飼養層;P3～P30代包皮成纖維細胞上清液中FGF含量在(172.09±2.66)pg/L～(245.25±1.66)pg/L之間波動.分離培養的人胚胎生殖細胞在飼養層上可形成典型的胚胎生殖細胞集落,體外連續培養超過3代,其堿性燐痠酶活性呈彊暘性,集落未分化標誌檢測顯示SSEA-l、SSEA-4呈暘性,Oct-4錶達暘性.結論 用人包皮成纖維細胞作為飼養層能支持人胚胎生殖細胞的生長併維持未分化狀態.
목적 이인포피성섬유세포위사양층체외배양인배태생식세포,관찰사양층대기생장적영향,병대인배태생식세포진행감정.방법 분리배양4～5세소인포피성섬유세포,취P3～P30대세포용사렬매소멸활후포판비용,매련면역흡부측정(ELISA)-쌍항협심법검측기분비물성섬유세포생장인자(FGF)적함량;분리배양5～11주인배태원시생식세포,재불첨가임하세포인자적인포피성섬유세포사양층상배양인배태생식세포;세포화학법검측인배태생식세포감성린산매적활성,면역세포화학법검측기배태표면특이성항원SSEA-1급SSEA-4적표체,RT-PCR법검측Oct-4적표체.결과 포피성섬유세포가이전60대이상,P3～P30대균괄의작사양층;P3～P30대포피성섬유세포상청액중FGF함량재(172.09±2.66)pg/L～(245.25±1.66)pg/L지간파동.분리배양적인배태생식세포재사양층상가형성전형적배태생식세포집락,체외련속배양초과3대,기감성린산매활성정강양성,집락미분화표지검측현시SSEA-l、SSEA-4정양성,Oct-4표체양성.결론 용인포피성섬유세포작위사양층능지지인배태생식세포적생장병유지미분화상태.
