中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
90-94
,共5页
金黄葡萄球菌%fnbB基因%克隆%原核表达
金黃葡萄毬菌%fnbB基因%剋隆%原覈錶達
금황포도구균%fnbB기인%극륭%원핵표체
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起奶牛乳房炎主要致病菌之一,主要通过其菌体表面的黏附素侵入寄主细胞引起疾病,为奶牛业造成巨大损失.金黄色葡萄球菌表面蛋白纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FnBP)是其关键的黏附因子,在研制抗金黄色葡萄球菌的新型疫苗中占有重要地位.本文根据GenBank中纤连蛋白结合蛋白B基因(fnbB)序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得3 458 bp的DNA片段.使用T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM T easy Vector中,成功构建出了克隆质粒pGEM-fnbB.以BamHI和XhoⅠ双酶切pGEM-fnbB和pET28a(+),并将纯化的基因fnbB亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达质粒pET28a-fnbB,并将其转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经1 mmol/L的IPTG诱导和SDS-PAGE分析,在约165 ku处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带,Western blot分析结果表明该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性.金黄色葡萄球菌pET28a-fnbB成功表达为金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎的诊断和研究新型疫苗奠定基础.
金黃色葡萄毬菌(Staphylococcus aureus)是引起奶牛乳房炎主要緻病菌之一,主要通過其菌體錶麵的黏附素侵入寄主細胞引起疾病,為奶牛業造成巨大損失.金黃色葡萄毬菌錶麵蛋白纖連蛋白結閤蛋白(fibronectin-binding protein,FnBP)是其關鍵的黏附因子,在研製抗金黃色葡萄毬菌的新型疫苗中佔有重要地位.本文根據GenBank中纖連蛋白結閤蛋白B基因(fnbB)序列設計特異性引物,以金黃色葡萄毬菌基因組DNA為模闆,進行PCR擴增,穫得3 458 bp的DNA片段.使用T-A剋隆技術,將PCR產物剋隆至pGEM T easy Vector中,成功構建齣瞭剋隆質粒pGEM-fnbB.以BamHI和XhoⅠ雙酶切pGEM-fnbB和pET28a(+),併將純化的基因fnbB亞剋隆至pET28a(+)中,構建齣原覈錶達質粒pET28a-fnbB,併將其轉化至E.coli BL21(DE3)感受態細胞中,經1 mmol/L的IPTG誘導和SDS-PAGE分析,在約165 ku處齣現瞭與預期目的蛋白相一緻的外源蛋白帶,Western blot分析結果錶明該蛋白具有金黃色葡萄毬菌的抗原性.金黃色葡萄毬菌pET28a-fnbB成功錶達為金黃色葡萄毬菌引起的奶牛乳房炎的診斷和研究新型疫苗奠定基礎.
금황색포도구균(Staphylococcus aureus)시인기내우유방염주요치병균지일,주요통과기균체표면적점부소침입기주세포인기질병,위내우업조성거대손실.금황색포도구균표면단백섬련단백결합단백(fibronectin-binding protein,FnBP)시기관건적점부인자,재연제항금황색포도구균적신형역묘중점유중요지위.본문근거GenBank중섬련단백결합단백B기인(fnbB)서렬설계특이성인물,이금황색포도구균기인조DNA위모판,진행PCR확증,획득3 458 bp적DNA편단.사용T-A극륭기술,장PCR산물극륭지pGEM T easy Vector중,성공구건출료극륭질립pGEM-fnbB.이BamHI화XhoⅠ쌍매절pGEM-fnbB화pET28a(+),병장순화적기인fnbB아극륭지pET28a(+)중,구건출원핵표체질립pET28a-fnbB,병장기전화지E.coli BL21(DE3)감수태세포중,경1 mmol/L적IPTG유도화SDS-PAGE분석,재약165 ku처출현료여예기목적단백상일치적외원단백대,Western blot분석결과표명해단백구유금황색포도구균적항원성.금황색포도구균pET28a-fnbB성공표체위금황색포도구균인기적내우유방염적진단화연구신형역묘전정기출.
