第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2008年
9期
1110-1113
,共4页
席俊%张改平%张利娜%张红%乔松林%苗现伟%何礼洋%张乃生
席俊%張改平%張利娜%張紅%喬鬆林%苗現偉%何禮洋%張迺生
석준%장개평%장리나%장홍%교송림%묘현위%하례양%장내생
huFcγRⅡ受体%COS7细胞%免疫荧光检测%玫瑰花环试验
huFcγRⅡ受體%COS7細胞%免疫熒光檢測%玫瑰花環試驗
huFcγRⅡ수체%COS7세포%면역형광검측%매괴화배시험
目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础.方法:采用RT-PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcγRⅡ表达质粒pcDNA3-huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆.采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcγRⅡ的表达.结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光.结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒,建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础.
目的:建立穩定錶達人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ ,huFcγRⅡ)的真覈細胞繫,為後續研究奠定基礎.方法:採用RT-PCR方法從人外週血白細胞閤成FcγRⅡcDNA,構建huFcγRⅡ錶達質粒pcDNA3-huFcγRⅡ,經酶切和PCR鑒定後,將pcDNA3-huFcγRⅡ質粒通過脂質體轉染法轉染COS7細胞,併經G418篩選穫得穩定錶達huFcγRⅡ的細胞剋隆.採用免疫熒光法和玫瑰花環試驗檢測huFcγRⅡ的錶達.結果:構建的pcDNA3-huFcγRⅡ真覈錶達質粒經酶切鑒定與預期一緻,穩定轉入COS7細胞後,經免疫熒光染色,約90%的轉染細胞可見熒光,而未轉染的COS7對照細胞未見熒光.結論:成功構建pcDNA3-huFcγRⅡ真覈錶達質粒,建立瞭穩定錶達huFcγRⅡ的細胞繫,為進一步研究奠定瞭基礎.
목적:건립은정표체인FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ ,huFcγRⅡ)적진핵세포계,위후속연구전정기출.방법:채용RT-PCR방법종인외주혈백세포합성FcγRⅡcDNA,구건huFcγRⅡ표체질립pcDNA3-huFcγRⅡ,경매절화PCR감정후,장pcDNA3-huFcγRⅡ질립통과지질체전염법전염COS7세포,병경G418사선획득은정표체huFcγRⅡ적세포극륭.채용면역형광법화매괴화배시험검측huFcγRⅡ적표체.결과:구건적pcDNA3-huFcγRⅡ진핵표체질립경매절감정여예기일치,은정전입COS7세포후,경면역형광염색,약90%적전염세포가견형광,이미전염적COS7대조세포미견형광.결론:성공구건pcDNA3-huFcγRⅡ진핵표체질립,건립료은정표체huFcγRⅡ적세포계,위진일보연구전정료기출.
