中国肿瘤临床
中國腫瘤臨床
중국종류림상
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY
2009年
18期
1067-1070
,共4页
刘忠臣%李文珠%齐忠权%丁志杰%袁思波%牛丽文%庄国洪
劉忠臣%李文珠%齊忠權%丁誌傑%袁思波%牛麗文%莊國洪
류충신%리문주%제충권%정지걸%원사파%우려문%장국홍
FasL%肿瘤%凋亡
FasL%腫瘤%凋亡
FasL%종류%조망
目的:构建适于原核表达的重组蛋白FasL表达载体,并进行重组蛋白的表达纯化及抗肿瘤活性分析.方法:获得人FasL cDNA全序列,将其分段设计引物,通过重叠PCR获得FasL基因.构建pGEX-5X-1/FasL表达载体.转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST柱纯化.采用MTT比色法、流式细胞法检测融合蛋白对胃癌细胞的作用.结果:通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因.表达的目的蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后,蛋白纯度达95%rX上.MTT比色法与流式细胞技术均表明纯化的融合蛋白能抑制胃癌细胞株BGC823和MGC803的生长,诱导其调亡增加.结论:重组蛋白FasL表达载体的成功构建、表达、纯化及活性分析,为进一步的抗肿瘤功能研究奠定了基础.
目的:構建適于原覈錶達的重組蛋白FasL錶達載體,併進行重組蛋白的錶達純化及抗腫瘤活性分析.方法:穫得人FasL cDNA全序列,將其分段設計引物,通過重疊PCR穫得FasL基因.構建pGEX-5X-1/FasL錶達載體.轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達,GST柱純化.採用MTT比色法、流式細胞法檢測融閤蛋白對胃癌細胞的作用.結果:通過重疊PCR穫得瞭編碼正確氨基痠序列的目的基因.錶達的目的蛋白錶達量佔菌體總蛋白的30%以上.純化後,蛋白純度達95%rX上.MTT比色法與流式細胞技術均錶明純化的融閤蛋白能抑製胃癌細胞株BGC823和MGC803的生長,誘導其調亡增加.結論:重組蛋白FasL錶達載體的成功構建、錶達、純化及活性分析,為進一步的抗腫瘤功能研究奠定瞭基礎.
목적:구건괄우원핵표체적중조단백FasL표체재체,병진행중조단백적표체순화급항종류활성분석.방법:획득인FasL cDNA전서렬,장기분단설계인물,통과중첩PCR획득FasL기인.구건pGEX-5X-1/FasL표체재체.전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체,GST주순화.채용MTT비색법、류식세포법검측융합단백대위암세포적작용.결과:통과중첩PCR획득료편마정학안기산서렬적목적기인.표체적목적단백표체량점균체총단백적30%이상.순화후,단백순도체95%rX상.MTT비색법여류식세포기술균표명순화적융합단백능억제위암세포주BGC823화MGC803적생장,유도기조망증가.결론:중조단백FasL표체재체적성공구건、표체、순화급활성분석,위진일보적항종류공능연구전정료기출.
