南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
4期
677-680
,共4页
郑培明%吴锦雅%顾金保%屠志坚%陈晓光
鄭培明%吳錦雅%顧金保%屠誌堅%陳曉光
정배명%오금아%고금보%도지견%진효광
白纹伊蚊%miRNA%Northern blotting%表达谱
白紋伊蚊%miRNA%Northern blotting%錶達譜
백문이문%miRNA%Northern blotting%표체보
目的 通过Northern blotting方法验证白纹伊蚊microRNA的存在并分析其不同发育阶段的表达谱.方法 根据miRBase中冈比亚按蚊的已知miRNA序列设计合成6条特异的LNA反义寡核苷酸探针,并用地高辛标记.用mirVanaTM miRNA Isolation Kit分别提取白纹伊蚊卵、一二期幼虫、三四期幼虫、蛹、雄蚊、雌蚊等六个不同发育阶段的Total RNA,15%的尿素变性PAGE电泳分离小RNA,转膜、交联、杂交、检测.结果 共检测到5种miRNA的表达,其中包括3种保守的miRNA,2种蚊虫特异的miRNA,其表达方式既有组成型表达又有期特异性表达,如miR-184在各个阶段均有表达,let-7在幼虫后期才开始有表达,miR-9a主要在卵及幼虫阶段表达,miR-M1只在蚊虫卵期有表达,miR-1175在除卵期之外的其他阶段有表达而miR-1174未检测到有表达.结论 首次验证了白纹伊蚊中miRNA的存在,初步证明了miRNA在白纹伊蚊发育过程中的保守性和特异性,为白纹伊蚊胚胎生长、变态发育等生命进程的研究以及新的杀虫剂的研制提供了新的思路和方法.
目的 通過Northern blotting方法驗證白紋伊蚊microRNA的存在併分析其不同髮育階段的錶達譜.方法 根據miRBase中岡比亞按蚊的已知miRNA序列設計閤成6條特異的LNA反義寡覈苷痠探針,併用地高辛標記.用mirVanaTM miRNA Isolation Kit分彆提取白紋伊蚊卵、一二期幼蟲、三四期幼蟲、蛹、雄蚊、雌蚊等六箇不同髮育階段的Total RNA,15%的尿素變性PAGE電泳分離小RNA,轉膜、交聯、雜交、檢測.結果 共檢測到5種miRNA的錶達,其中包括3種保守的miRNA,2種蚊蟲特異的miRNA,其錶達方式既有組成型錶達又有期特異性錶達,如miR-184在各箇階段均有錶達,let-7在幼蟲後期纔開始有錶達,miR-9a主要在卵及幼蟲階段錶達,miR-M1隻在蚊蟲卵期有錶達,miR-1175在除卵期之外的其他階段有錶達而miR-1174未檢測到有錶達.結論 首次驗證瞭白紋伊蚊中miRNA的存在,初步證明瞭miRNA在白紋伊蚊髮育過程中的保守性和特異性,為白紋伊蚊胚胎生長、變態髮育等生命進程的研究以及新的殺蟲劑的研製提供瞭新的思路和方法.
목적 통과Northern blotting방법험증백문이문microRNA적존재병분석기불동발육계단적표체보.방법 근거miRBase중강비아안문적이지miRNA서렬설계합성6조특이적LNA반의과핵감산탐침,병용지고신표기.용mirVanaTM miRNA Isolation Kit분별제취백문이문란、일이기유충、삼사기유충、용、웅문、자문등륙개불동발육계단적Total RNA,15%적뇨소변성PAGE전영분리소RNA,전막、교련、잡교、검측.결과 공검측도5충miRNA적표체,기중포괄3충보수적miRNA,2충문충특이적miRNA,기표체방식기유조성형표체우유기특이성표체,여miR-184재각개계단균유표체,let-7재유충후기재개시유표체,miR-9a주요재란급유충계단표체,miR-M1지재문충란기유표체,miR-1175재제란기지외적기타계단유표체이miR-1174미검측도유표체.결론 수차험증료백문이문중miRNA적존재,초보증명료miRNA재백문이문발육과정중적보수성화특이성,위백문이문배태생장、변태발육등생명진정적연구이급신적살충제적연제제공료신적사로화방법.
