生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
3期
328-331
,共4页
田利源%胡亚欧%李秀丽%汪莉%王玉民
田利源%鬍亞歐%李秀麗%汪莉%王玉民
전리원%호아구%리수려%왕리%왕옥민
β-防御素30%抗菌肽%原核表达%亲和纯化%免疫避孕
β-防禦素30%抗菌肽%原覈錶達%親和純化%免疫避孕
β-방어소30%항균태%원핵표체%친화순화%면역피잉
目的:在原核细胞中表达小鼠β-防御素30(DEFB30),并对表达产物进行鉴定和纯化.方法:用RT-PCR方法扩增小鼠Defb30的cDNA序列,将2个拷贝的cDNA序列串联连入原核表达载体pET28(a),构建重组表达载体pET28(a)-Defb30,并将重组表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,以Western印迹分析表达产物His-DEFB30,用Ni-NTA亲和柱纯化融合蛋白.结果:构建了Defb30基因的原核表达载体,经IPTG诱导,相对分子质量约15×103的融合蛋白获得表达,Western印迹分析证实此蛋白即为目的蛋白,经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了高纯度的融合蛋白His-DEFB30.结论:获得了在大肠杆菌中表达的DEFB30,为研究该蛋白的免疫避孕效果、抗菌活性奠定了基础.
目的:在原覈細胞中錶達小鼠β-防禦素30(DEFB30),併對錶達產物進行鑒定和純化.方法:用RT-PCR方法擴增小鼠Defb30的cDNA序列,將2箇拷貝的cDNA序列串聯連入原覈錶達載體pET28(a),構建重組錶達載體pET28(a)-Defb30,併將重組錶達載體轉化至大腸桿菌Rosetta(DE3),IPTG誘導錶達,以Western印跡分析錶達產物His-DEFB30,用Ni-NTA親和柱純化融閤蛋白.結果:構建瞭Defb30基因的原覈錶達載體,經IPTG誘導,相對分子質量約15×103的融閤蛋白穫得錶達,Western印跡分析證實此蛋白即為目的蛋白,經Ni-NTA柱親和純化,穫得瞭高純度的融閤蛋白His-DEFB30.結論:穫得瞭在大腸桿菌中錶達的DEFB30,為研究該蛋白的免疫避孕效果、抗菌活性奠定瞭基礎.
목적:재원핵세포중표체소서β-방어소30(DEFB30),병대표체산물진행감정화순화.방법:용RT-PCR방법확증소서Defb30적cDNA서렬,장2개고패적cDNA서렬천련련입원핵표체재체pET28(a),구건중조표체재체pET28(a)-Defb30,병장중조표체재체전화지대장간균Rosetta(DE3),IPTG유도표체,이Western인적분석표체산물His-DEFB30,용Ni-NTA친화주순화융합단백.결과:구건료Defb30기인적원핵표체재체,경IPTG유도,상대분자질량약15×103적융합단백획득표체,Western인적분석증실차단백즉위목적단백,경Ni-NTA주친화순화,획득료고순도적융합단백His-DEFB30.결론:획득료재대장간균중표체적DEFB30,위연구해단백적면역피잉효과、항균활성전정료기출.
