生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
6期
794-797
,共4页
张丽华%王洋%何彰华%刘晓洁%师明磊%何建勇%赵志虎
張麗華%王洋%何彰華%劉曉潔%師明磊%何建勇%趙誌虎
장려화%왕양%하창화%류효길%사명뢰%하건용%조지호
eryA Ⅲ基因%聚酮合成酶%红霉素链霉菌%分子伴侣GroELS%异源表达%长片段PCR
eryA Ⅲ基因%聚酮閤成酶%紅黴素鏈黴菌%分子伴侶GroELS%異源錶達%長片段PCR
eryA Ⅲ기인%취동합성매%홍매소련매균%분자반려GroELS%이원표체%장편단PCR
目的:在大肠杆菌中异源表达红霉素链霉菌聚酮合成酶eryA Ⅲ基因.方法:构建表达载体pET-m28a,PCR扩增高GC含量长片段基因eryA Ⅲ及分子伴侣GroELS的基因,并插入该载体,每个基因都能够独立启动和终止表达;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达.结果:NdeⅠ、Hind Ⅲ分别酶切质粒pET-m28a/eryA Ⅲ-GroELS,琼脂糖凝胶电泳显示获得与预期大小相同的DNA片段;SDS-PAGE结果表明,重组大肠杆菌表达了由eryA Ⅲ编码的相对分子质量为348×103的蛋白;与GroELS共表达后,目的蛋白在上清中的表达量明显增加.结论:GroELS提高了eryA Ⅲ编码蛋白的可溶性,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础.
目的:在大腸桿菌中異源錶達紅黴素鏈黴菌聚酮閤成酶eryA Ⅲ基因.方法:構建錶達載體pET-m28a,PCR擴增高GC含量長片段基因eryA Ⅲ及分子伴侶GroELS的基因,併插入該載體,每箇基因都能夠獨立啟動和終止錶達;將重組質粒轉化至大腸桿菌BL21(DE3),用IPTG進行誘導錶達.結果:NdeⅠ、Hind Ⅲ分彆酶切質粒pET-m28a/eryA Ⅲ-GroELS,瓊脂糖凝膠電泳顯示穫得與預期大小相同的DNA片段;SDS-PAGE結果錶明,重組大腸桿菌錶達瞭由eryA Ⅲ編碼的相對分子質量為348×103的蛋白;與GroELS共錶達後,目的蛋白在上清中的錶達量明顯增加.結論:GroELS提高瞭eryA Ⅲ編碼蛋白的可溶性,為紅黴素閤成通路在大腸桿菌中的重建奠定瞭基礎.
목적:재대장간균중이원표체홍매소련매균취동합성매eryA Ⅲ기인.방법:구건표체재체pET-m28a,PCR확증고GC함량장편단기인eryA Ⅲ급분자반려GroELS적기인,병삽입해재체,매개기인도능구독립계동화종지표체;장중조질립전화지대장간균BL21(DE3),용IPTG진행유도표체.결과:NdeⅠ、Hind Ⅲ분별매절질립pET-m28a/eryA Ⅲ-GroELS,경지당응효전영현시획득여예기대소상동적DNA편단;SDS-PAGE결과표명,중조대장간균표체료유eryA Ⅲ편마적상대분자질량위348×103적단백;여GroELS공표체후,목적단백재상청중적표체량명현증가.결론:GroELS제고료eryA Ⅲ편마단백적가용성,위홍매소합성통로재대장간균중적중건전정료기출.
