CAJ | 학술논문

目的:探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad 信号转导的抗肝纤维化作用机制.方法:本研究分体内实验和体外实验两部分.在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组(5只)、模型组(18只)和扶正化瘀方组(14只).模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型.灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1 Ⅰ型受体(TGF-β1 typeⅠ receptor,TβR-Ⅰ)、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达.体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),分为对照组、TGF-β1组、10％扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂(SB-431542)组.后3组用2.5 ng/mL TGF-β1刺激24 h后,对照组及TGF-β1组加10％正常大鼠血清,10％扶正化瘀方药物血清组加10％服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10％正常大鼠血清及10 μmol/L SB-431542.共孵育24 h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达.结果:体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达.体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达；扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达；正常HSC Smad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位.结论:扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制.
목적:탐토부정화어방영향전화생장인자β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad 신호전도적항간섬유화작용궤제.방법:본연구분체내실험화체외실험량부분.재체내실험중,37지웅성Wistar대서분위정상조(5지)、모형조(18지)화부정화어방조(14지).모형조화부정화어조대서채용이갑기아초알(dimethylnitrosamine,DMN)복강주사복제대서간섬유화모형.관위치료4주후,채용염산수해법검측간조직중간포안산(hydroxyproline,Hyp)함량,단백질인적법분석간조직중TGF-β1、TGF-β1 Ⅰ형수체(TGF-β1 typeⅠ receptor,TβR-Ⅰ)、Smad2、Smad3급린산화Smad2/3단백적표체.체외실험채용배양4d적원대대서간성상세포(hepatic stellate cell,HSC),분위대조조、TGF-β1조、10％부정화어방약물혈청조급TβR-Ⅰ포내격매억제제(SB-431542)조.후3조용2.5 ng/mL TGF-β1자격24 h후,대조조급TGF-β1조가10％정상대서혈청,10％부정화어방약물혈청조가10％복용부정화어방적대서혈청,SB-431542조가10％정상대서혈청급10 μmol/L SB-431542.공부육24 h후,면역형광염색검측HSC중α평활기기동단백(α-smooth muscle actin,α-SMA)화Smad3단백적표체,단백질인적법분석HSC중α-SMA단백적표체.결과:체내실험발현,부정화어방가명현강저섬유화간조직중이상승고적Hyp함량급TGF-β1、TβR-Ⅰ、린산화Smad2/3단백적표체.체외연구발현,정상HSC중α-SMA、TβR-Ⅰ표체교저,TGF-β1자격가현저상조기표체；부정화어방약물혈청공부육후,가명현억제TGF-β1유도적HSC중α-SMA적표체；정상HSC Smad3주요표체재세포질중,세포핵중표체교저,TGF-β1가현저자격Smad3향세포핵전이,부정화어방약물혈청가명현억제TGF-β1유도적Smad3핵전위.결론:부정화어방가하조섬유화대서간장급HSC중적TGF-β1/Smad병리신호전도통로,저가능시부정화어방항간섬유화적부분작용궤제.