微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
4期
543-546
,共4页
谭秀华%武玉永%马立新%蒋思婧
譚秀華%武玉永%馬立新%蔣思婧
담수화%무옥영%마립신%장사청
甘露聚糖酶%克隆%毕赤酵母%表达%酶活
甘露聚糖酶%剋隆%畢赤酵母%錶達%酶活
감로취당매%극륭%필적효모%표체%매활
通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株.构建其基因组文库,从中筛选到甘露聚糖酶基因TM1并测序分析,用BLAST分析表明,TM1的氨基酸序列与其他在GenBank发表的甘露聚糖酶的氨基酸序列的同源性均低于60%,故确定其为一个新的甘露聚糖酶基因(GenBank登录号为AY623903).将此基因去除信号肽后的编码序列克隆到表达载体pHBM905C上,得到重组质粒pHBM1201.经SalⅠ酶切后分别转化毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71、GS115、SMD1168,得到分泌表达的重组毕赤酵母.挑选相对表达量最高的重组毕赤酵母SMD1168-3在摇瓶中诱导产酶,对该酶的粗酶进行酶学性质分析表明,其最适反应温度为55℃,最适PH值为7.5,以魔芋粉为底物所测得的最高酶活为41.8U,半衰期为1h,在80℃保温5min其酶活由最初酶活的77%下降到11%,温度下降到55℃后活性可恢复到最初酶活的60%以上.
通過功能平闆從土壤中篩選得到含甘露聚糖酶基因的耐堿菌株.構建其基因組文庫,從中篩選到甘露聚糖酶基因TM1併測序分析,用BLAST分析錶明,TM1的氨基痠序列與其他在GenBank髮錶的甘露聚糖酶的氨基痠序列的同源性均低于60%,故確定其為一箇新的甘露聚糖酶基因(GenBank登錄號為AY623903).將此基因去除信號肽後的編碼序列剋隆到錶達載體pHBM905C上,得到重組質粒pHBM1201.經SalⅠ酶切後分彆轉化畢赤酵母(Pichia pastoris)KM71、GS115、SMD1168,得到分泌錶達的重組畢赤酵母.挑選相對錶達量最高的重組畢赤酵母SMD1168-3在搖瓶中誘導產酶,對該酶的粗酶進行酶學性質分析錶明,其最適反應溫度為55℃,最適PH值為7.5,以魔芋粉為底物所測得的最高酶活為41.8U,半衰期為1h,在80℃保溫5min其酶活由最初酶活的77%下降到11%,溫度下降到55℃後活性可恢複到最初酶活的60%以上.
통과공능평판종토양중사선득도함감로취당매기인적내감균주.구건기기인조문고,종중사선도감로취당매기인TM1병측서분석,용BLAST분석표명,TM1적안기산서렬여기타재GenBank발표적감로취당매적안기산서렬적동원성균저우60%,고학정기위일개신적감로취당매기인(GenBank등록호위AY623903).장차기인거제신호태후적편마서렬극륭도표체재체pHBM905C상,득도중조질립pHBM1201.경SalⅠ매절후분별전화필적효모(Pichia pastoris)KM71、GS115、SMD1168,득도분비표체적중조필적효모.도선상대표체량최고적중조필적효모SMD1168-3재요병중유도산매,대해매적조매진행매학성질분석표명,기최괄반응온도위55℃,최괄PH치위7.5,이마우분위저물소측득적최고매활위41.8U,반쇠기위1h,재80℃보온5min기매활유최초매활적77%하강도11%,온도하강도55℃후활성가회복도최초매활적60%이상.
