细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
5期
423-425
,共3页
袁明涛%肖少波%方六荣%方亮%陈焕春
袁明濤%肖少波%方六榮%方亮%陳煥春
원명도%초소파%방륙영%방량%진환춘
湖北白猪%CD154%克隆%表达
湖北白豬%CD154%剋隆%錶達
호북백저%CD154%극륭%표체
目的:克隆湖北白猪CD154基因,并在大肠杆菌及HeLa细胞中表达.方法:利用RT-PCR方法从湖北白猪外周血单核细胞中扩增出猪CD154基因的完整编码区,进一步PCR扩增获得缺失信号肽、跨膜区的截短型CD154,将其克隆至原核表达载体pQE-80L的6×His下游,获得原核表达质粒pQE-tCD154,转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达.同时,将完整CD154基因克隆至真核表达载体pEGFP-C1的EGFP基因下游,获得融合蛋白表达质粒pEGFP-C1-CD154,转染HeLa细胞进行表达.结果:原核表达质粒pQE-tCD154,转化大肠杆菌DH5α诱导表达出相对分子量(Mr)为29 000的融合表达蛋白6×His-tCD154,Western blot分析证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体(mAb)发生特异性反应.融合蛋白表达质粒pEGFP-C1-CD154,转染HeLa细胞,荧光显微镜观察到EGFP-CD154融合蛋白的表达主要定位于细胞膜.结论:成功地克隆并表达了猪CD154基因.
目的:剋隆湖北白豬CD154基因,併在大腸桿菌及HeLa細胞中錶達.方法:利用RT-PCR方法從湖北白豬外週血單覈細胞中擴增齣豬CD154基因的完整編碼區,進一步PCR擴增穫得缺失信號肽、跨膜區的截短型CD154,將其剋隆至原覈錶達載體pQE-80L的6×His下遊,穫得原覈錶達質粒pQE-tCD154,轉化大腸桿菌DH5α進行誘導錶達.同時,將完整CD154基因剋隆至真覈錶達載體pEGFP-C1的EGFP基因下遊,穫得融閤蛋白錶達質粒pEGFP-C1-CD154,轉染HeLa細胞進行錶達.結果:原覈錶達質粒pQE-tCD154,轉化大腸桿菌DH5α誘導錶達齣相對分子量(Mr)為29 000的融閤錶達蛋白6×His-tCD154,Western blot分析證實錶達的融閤蛋白能與抗6×His的單剋隆抗體(mAb)髮生特異性反應.融閤蛋白錶達質粒pEGFP-C1-CD154,轉染HeLa細胞,熒光顯微鏡觀察到EGFP-CD154融閤蛋白的錶達主要定位于細胞膜.結論:成功地剋隆併錶達瞭豬CD154基因.
목적:극륭호북백저CD154기인,병재대장간균급HeLa세포중표체.방법:이용RT-PCR방법종호북백저외주혈단핵세포중확증출저CD154기인적완정편마구,진일보PCR확증획득결실신호태、과막구적절단형CD154,장기극륭지원핵표체재체pQE-80L적6×His하유,획득원핵표체질립pQE-tCD154,전화대장간균DH5α진행유도표체.동시,장완정CD154기인극륭지진핵표체재체pEGFP-C1적EGFP기인하유,획득융합단백표체질립pEGFP-C1-CD154,전염HeLa세포진행표체.결과:원핵표체질립pQE-tCD154,전화대장간균DH5α유도표체출상대분자량(Mr)위29 000적융합표체단백6×His-tCD154,Western blot분석증실표체적융합단백능여항6×His적단극륭항체(mAb)발생특이성반응.융합단백표체질립pEGFP-C1-CD154,전염HeLa세포,형광현미경관찰도EGFP-CD154융합단백적표체주요정위우세포막.결론:성공지극륭병표체료저CD154기인.
