CAJ | 학술논문

山羊和奶牛具有非常相似的泌乳过程,但在产乳量和乳成分(脂肪和蛋白含量)之间存在很大的差异,而且山羊奶还具有特殊的膻味.本研究根据山羊和牛在基因编码序列上具有非常高的保守性原理,利用抑制消减杂交技术对3只西农萨能奶山羊和3头荷斯坦奶牛泌乳末期的乳腺组织进行差异表达基因分析.分别提取山羊和牛乳腺组织总RNA,分离mRNA并合成cDNA,以山羊乳腺组织cDNA作为测试,牛的乳腺组织cDNA作为对照.cDNA经RsaⅠ酶切后将测试组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增.随机挑选克隆经PCR鉴定发现有150个克隆具有200 bp-1 000 bp插入片段,挑选50个差异片段不等的克隆进行测序及同源性分析,结果得到5个已知乳蛋白(αs2酪蛋白、β酪蛋白、К酪蛋白、α乳清白蛋白和β乳球蛋白)基因的编码序列和6个新的EST序列,EST序列已登录GenBank, 登录号分别为EG588067、EG588068、EG588069、EG588070、EG588071和EG588072.通过半定量RT-PCR分析,发现β酪蛋白基因mRNA表达量在山羊乳腺中显著高于其在牛乳腺中的表达量,К酪蛋白在乳腺中的mRNA 含量与其所表达的蛋白质在乳中含量存在很大差异,表明К酪蛋白虽然和其他酪蛋白具有相同的调控机制,但其在分泌和运输机制上与其他酪蛋白不同.
산양화내우구유비상상사적비유과정,단재산유량화유성분(지방화단백함량)지간존재흔대적차이,이차산양내환구유특수적단미.본연구근거산양화우재기인편마서렬상구유비상고적보수성원리,이용억제소감잡교기술대3지서농살능내산양화3두하사탄내우비유말기적유선조직진행차이표체기인분석.분별제취산양화우유선조직총RNA,분리mRNA병합성cDNA,이산양유선조직cDNA작위측시,우적유선조직cDNA작위대조.cDNA경RsaⅠ매절후장측시조cDNA분성량조,분별함접량충불동접두,재여대조조cDNA진행량차소감잡교급량차PCR반응,산물여T/A극륭재체련접,구건cDNA소감문고,병전염대장간균진행문고확증.수궤도선극륭경PCR감정발현유150개극륭구유200 bp-1 000 bp삽입편단,도선50개차이편단불등적극륭진행측서급동원성분석,결과득도5개이지유단백(αs2락단백、β락단백、К락단백、α유청백단백화β유구단백)기인적편마서렬화6개신적EST서렬,EST서렬이등록GenBank, 등록호분별위EG588067、EG588068、EG588069、EG588070、EG588071화EG588072.통과반정량RT-PCR분석,발현β락단백기인mRNA표체량재산양유선중현저고우기재우유선중적표체량,К락단백재유선중적mRNA 함량여기소표체적단백질재유중함량존재흔대차이,표명К락단백수연화기타락단백구유상동적조공궤제,단기재분비화운수궤제상여기타락단백불동.