上海师范大学学报（自然科学版）
上海師範大學學報（自然科學版）
상해사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI TEACHERS UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2008年
3期
301-304
,共4页
汪滢%章秀%吴双秀%王全喜
汪瀅%章秀%吳雙秀%王全喜
왕형%장수%오쌍수%왕전희
葛仙米%SOD基因克隆%诱导表达
葛仙米%SOD基因剋隆%誘導錶達
갈선미%SOD기인극륭%유도표체
采用PCR技术从葛仙米(Nostoc sphaeroides)总DNA中克隆了一段基因序列,该序列与基因库中已公布的编码普通念珠藻(Nostoc commnue)超氧化物歧化酶的氨基酸序列同源性为98%.将该基因插入含,T7启动子的质粒pET-32a(+)中构建表达质粒pET-sod,然后将该表达质粒转入大肠杆菌BL21中进行蛋白表达,表达菌株用1mmol/L IPTG诱导表达数小时后,产生较多重组的蛋白,且该蛋白以可溶性蛋白形式存在.SDS-PAGE分析表明:在相对分子量约为22kd的位置有一条明显蛋白质带.将诱导表达后的蛋白通过亲和层析的方法进行蛋白纯化;NBT光还原法测定表达产物的比活力,每毫克纯化蛋白约为2550U.
採用PCR技術從葛仙米(Nostoc sphaeroides)總DNA中剋隆瞭一段基因序列,該序列與基因庫中已公佈的編碼普通唸珠藻(Nostoc commnue)超氧化物歧化酶的氨基痠序列同源性為98%.將該基因插入含,T7啟動子的質粒pET-32a(+)中構建錶達質粒pET-sod,然後將該錶達質粒轉入大腸桿菌BL21中進行蛋白錶達,錶達菌株用1mmol/L IPTG誘導錶達數小時後,產生較多重組的蛋白,且該蛋白以可溶性蛋白形式存在.SDS-PAGE分析錶明:在相對分子量約為22kd的位置有一條明顯蛋白質帶.將誘導錶達後的蛋白通過親和層析的方法進行蛋白純化;NBT光還原法測定錶達產物的比活力,每毫剋純化蛋白約為2550U.
채용PCR기술종갈선미(Nostoc sphaeroides)총DNA중극륭료일단기인서렬,해서렬여기인고중이공포적편마보통념주조(Nostoc commnue)초양화물기화매적안기산서렬동원성위98%.장해기인삽입함,T7계동자적질립pET-32a(+)중구건표체질립pET-sod,연후장해표체질립전입대장간균BL21중진행단백표체,표체균주용1mmol/L IPTG유도표체수소시후,산생교다중조적단백,차해단백이가용성단백형식존재.SDS-PAGE분석표명:재상대분자량약위22kd적위치유일조명현단백질대.장유도표체후적단백통과친화층석적방법진행단백순화;NBT광환원법측정표체산물적비활력,매호극순화단백약위2550U.
