南京大学学报（自然科学版）
南京大學學報（自然科學版）
남경대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2000年
2期
208-212
,共5页
史蔚%朱慧%薛宇鸣%唐堂%马忠
史蔚%硃慧%薛宇鳴%唐堂%馬忠
사위%주혜%설우명%당당%마충
尿激酶原%定点突变%内在酶活性
尿激酶原%定點突變%內在酶活性
뇨격매원%정점돌변%내재매활성
利用定点突变方法,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Set,Tyr187→His,Lys300→His)及muk2(Ala175→Ser,Tyr187→His).两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL21中表达得到包涵体,经体外变复性,SP-Sepharose离子交换柱层析,Benzanmidine-Sepharose吸附除去双链尿激酶,得到的蛋白均为银染一条带,用人工合成的发色底物S2444测量muk1、muk2的动力学性质,muk1的内在酶活性比野生型pro-UK降低8倍,muk2的内在酶活性比野生型prm-UK降低2.5倍;它们经纤溶酶(plasmin)激活后的双链活性与pro-UK相比分别为muk1提高50%,muk2和pro-UK相当.在实验基础上讨论了pro-UK高内源性催化活性的机制及其结构基础.
利用定點突變方法,構建瞭尿激酶原變體基因muk1(Ala175→Set,Tyr187→His,Lys300→His)及muk2(Ala175→Ser,Tyr187→His).兩種尿激酶原變體在大腸桿菌BL21中錶達得到包涵體,經體外變複性,SP-Sepharose離子交換柱層析,Benzanmidine-Sepharose吸附除去雙鏈尿激酶,得到的蛋白均為銀染一條帶,用人工閤成的髮色底物S2444測量muk1、muk2的動力學性質,muk1的內在酶活性比野生型pro-UK降低8倍,muk2的內在酶活性比野生型prm-UK降低2.5倍;它們經纖溶酶(plasmin)激活後的雙鏈活性與pro-UK相比分彆為muk1提高50%,muk2和pro-UK相噹.在實驗基礎上討論瞭pro-UK高內源性催化活性的機製及其結構基礎.
이용정점돌변방법,구건료뇨격매원변체기인muk1(Ala175→Set,Tyr187→His,Lys300→His)급muk2(Ala175→Ser,Tyr187→His).량충뇨격매원변체재대장간균BL21중표체득도포함체,경체외변복성,SP-Sepharose리자교환주층석,Benzanmidine-Sepharose흡부제거쌍련뇨격매,득도적단백균위은염일조대,용인공합성적발색저물S2444측량muk1、muk2적동역학성질,muk1적내재매활성비야생형pro-UK강저8배,muk2적내재매활성비야생형prm-UK강저2.5배;타문경섬용매(plasmin)격활후적쌍련활성여pro-UK상비분별위muk1제고50%,muk2화pro-UK상당.재실험기출상토론료pro-UK고내원성최화활성적궤제급기결구기출.
