广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2009年
4期
409-413
,共5页
周俊立%蔡晓坤%杨翌%周卫平%王德全%姚振江
週俊立%蔡曉坤%楊翌%週衛平%王德全%姚振江
주준립%채효곤%양익%주위평%왕덕전%요진강
PNP-TK融合基因%肝癌%基因治疗
PNP-TK融閤基因%肝癌%基因治療
PNP-TK융합기인%간암%기인치료
目的 分析PNP-TK融合自杀基因系统对HepG2肝癌细胞的杀伤作用及其对肝癌细胞的杀伤机制.方法 利用重组PCR定点诱变法制备PNP-TK融合基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.0中,构建融合基因表达载体pcDNA3.0/PNP-TK,经酶切、PCR及测序鉴定重组体,G418筛选获得稳定转染了pcDNA3.0/PNP-TK的抗性细胞克隆.RT-PCR和Western Blotting检测PNP-TK基因在HepG2细胞中的表达.台盼兰排斥法测定细胞生长曲线,MTT法检测细胞对相应前药的敏感性及分别在一种和两种前药作用下所导致的旁观者效应.结果 融合基因片段PNP-TK正确插入了pcDNA3.0载体中,pcDNA3.0/PNP-TK在肝癌细胞株HepG2中实现了表达.细胞抗性克隆对相应的前药十分敏感.在两种前药的联合作用下,pcDNA3.0/PNP-TK对肝癌细胞产生了良好的旁观者效应.结论 具有双自杀基因功能的表达载体pcDNA3.0/PNP-TK对肝癌细胞HepG2有着良好的杀伤作用,有望将其应用于肝癌体内治疗.
目的 分析PNP-TK融閤自殺基因繫統對HepG2肝癌細胞的殺傷作用及其對肝癌細胞的殺傷機製.方法 利用重組PCR定點誘變法製備PNP-TK融閤基因,將其插入真覈錶達載體pcDNA3.0中,構建融閤基因錶達載體pcDNA3.0/PNP-TK,經酶切、PCR及測序鑒定重組體,G418篩選穫得穩定轉染瞭pcDNA3.0/PNP-TK的抗性細胞剋隆.RT-PCR和Western Blotting檢測PNP-TK基因在HepG2細胞中的錶達.檯盼蘭排斥法測定細胞生長麯線,MTT法檢測細胞對相應前藥的敏感性及分彆在一種和兩種前藥作用下所導緻的徬觀者效應.結果 融閤基因片段PNP-TK正確插入瞭pcDNA3.0載體中,pcDNA3.0/PNP-TK在肝癌細胞株HepG2中實現瞭錶達.細胞抗性剋隆對相應的前藥十分敏感.在兩種前藥的聯閤作用下,pcDNA3.0/PNP-TK對肝癌細胞產生瞭良好的徬觀者效應.結論 具有雙自殺基因功能的錶達載體pcDNA3.0/PNP-TK對肝癌細胞HepG2有著良好的殺傷作用,有望將其應用于肝癌體內治療.
목적 분석PNP-TK융합자살기인계통대HepG2간암세포적살상작용급기대간암세포적살상궤제.방법 이용중조PCR정점유변법제비PNP-TK융합기인,장기삽입진핵표체재체pcDNA3.0중,구건융합기인표체재체pcDNA3.0/PNP-TK,경매절、PCR급측서감정중조체,G418사선획득은정전염료pcDNA3.0/PNP-TK적항성세포극륭.RT-PCR화Western Blotting검측PNP-TK기인재HepG2세포중적표체.태반란배척법측정세포생장곡선,MTT법검측세포대상응전약적민감성급분별재일충화량충전약작용하소도치적방관자효응.결과 융합기인편단PNP-TK정학삽입료pcDNA3.0재체중,pcDNA3.0/PNP-TK재간암세포주HepG2중실현료표체.세포항성극륭대상응적전약십분민감.재량충전약적연합작용하,pcDNA3.0/PNP-TK대간암세포산생료량호적방관자효응.결론 구유쌍자살기인공능적표체재체pcDNA3.0/PNP-TK대간암세포HepG2유착량호적살상작용,유망장기응용우간암체내치료.
