CAJ | 학술논문

目的:克隆与内皮抑制素(endostatin)相互作用蛋白HT036基因的全长,进一步验证其与内皮抑制素的相互作用,初步阐明其促血管上皮细胞凋亡的分子机制.方法:实验于2004-10/2006-03在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成.①根据已知HT036的EST序列设计引物,应用RACE技术,从人胎肝cDNA文库获取该基因全长.②采用免疫共沉淀和Western Blot验证HT036蛋白与内皮抑制素在真核细胞内存在相互作用.③利用真核瞬时表达载体pCDNA3.1(+)在EVC304细胞中瞬时表达HT036蛋白,转染了HT036基因的EVC304细胞为试验组(重复两次);没有转染HT036基因的细胞为对照组,用流式细胞仪检测HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:①HT036基因全长克隆及生物信息学分析结果:利用RACE技术成功获得HT036基因的全长,并在GENEBANK进行了注册,注册号AY775560.②免疫共沉淀和Western-blot的验证结果:证实HT036蛋白能与内皮抑制素在真核细胞中相互作用.③HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响:成功构建了表达HT036基因的真恢表达载体,两次试验转染ECV304细胞后24 h的凋亡率平均为23.63%,而对照组仅为0.10%.结论:获得了一与内皮抑制素相互作用的新的蛋白HT036基因的全长,初步表明HT036参与了内皮抑制素调节的血管生成过程,并对血管上皮细胞具有促进凋亡的作用.
목적:극륭여내피억제소(endostatin)상호작용단백HT036기인적전장,진일보험증기여내피억제소적상호작용,초보천명기촉혈관상피세포조망적분자궤제.방법:실험우2004-10/2006-03재해방군총의원호흡과실험실、군사의학과학원방사의학화생물공정연구소실험실완성.①근거이지HT036적EST서렬설계인물,응용RACE기술,종인태간cDNA문고획취해기인전장.②채용면역공침정화Western Blot험증HT036단백여내피억제소재진핵세포내존재상호작용.③이용진핵순시표체재체pCDNA3.1(+)재EVC304세포중순시표체HT036단백,전염료HT036기인적EVC304세포위시험조(중복량차);몰유전염HT036기인적세포위대조조,용류식세포의검측HT036기인대세포조망화세포주기적영향.결과:①HT036기인전장극륭급생물신식학분석결과:이용RACE기술성공획득HT036기인적전장,병재GENEBANK진행료주책,주책호AY775560.②면역공침정화Western-blot적험증결과:증실HT036단백능여내피억제소재진핵세포중상호작용.③HT036기인대세포조망화세포주기적영향:성공구건료표체HT036기인적진회표체재체,량차시험전염ECV304세포후24 h적조망솔평균위23.63%,이대조조부위0.10%.결론:획득료일여내피억제소상호작용적신적단백HT036기인적전장,초보표명HT036삼여료내피억제소조절적혈관생성과정,병대혈관상피세포구유촉진조망적작용.