临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
臨床耳鼻嚥喉頭頸外科雜誌
림상이비인후두경외과잡지
JOURNAL OF CLINICAL OTORHINOLARYNGOLOGY HEAD AND NECK SURGERY
2011年
24期
1135-1138,1141
,共5页
王晓侠%姚小宝%嵇宪生%陈菁华%李蕾%朱宏亮
王曉俠%姚小寶%嵇憲生%陳菁華%李蕾%硃宏亮
왕효협%요소보%혜헌생%진정화%리뢰%주굉량
RNA干扰%EGFL7%喉肿瘤%慢病毒属
RNA榦擾%EGFL7%喉腫瘤%慢病毒屬
RNA간우%EGFL7%후종류%만병독속
目的:构建类表皮生长因子域7( EGFL7)基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒,观察其对喉癌体外侵袭的抑制作用.方法:筛选确定的EGFL7基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的pLV载体连接产生LV-sh EGFL7慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用重组慢病毒体外转导喉癌细胞,Western blot法检测喉癌细胞EGFL7蛋白表达.Boyden侵袭小室法实验观察转导shRNA后的喉癌细胞侵袭能力的变化.利用克隆形成实验检测EGFL7基因沉默对Hep-2细胞集落形成能力的影响.结果:成功构建EGFL7的慢病毒载体LV-sh EGFL7,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×108 TU/L.转导siRNA的喉癌细胞EGFL7蛋白表达阴性.EGFL7 siRNA转导后喉癌胞体外侵袭能力下降.EGFL7基因沉默组细胞克隆集落形成率与Hep-2组细胞及空载体组细胞比较,细胞克隆集落形成率显著减低.结论:成功构建人EGFL7基因RNAi慢病毒载体,EGFL7基因沉默对喉癌细胞体外侵袭有明显的抑制作用.沉默EGFL7后,Hep-2细胞集落形成能力显著减低,即下调EGFL7基因表达可在一定程度上抑制喉癌细胞的锚着不依赖性增殖能力.
目的:構建類錶皮生長因子域7( EGFL7)基因RNA榦擾(RNAi)重組慢病毒,觀察其對喉癌體外侵襲的抑製作用.方法:篩選確定的EGFL7基因RNAi有效靶序列,閤成靶序列的Oligo DNA,與含H1啟動子和綠色熒光蛋白(GFP)的pLV載體連接產生LV-sh EGFL7慢病毒載體,PCR篩選暘性剋隆,測序鑒定.用重組慢病毒體外轉導喉癌細胞,Western blot法檢測喉癌細胞EGFL7蛋白錶達.Boyden侵襲小室法實驗觀察轉導shRNA後的喉癌細胞侵襲能力的變化.利用剋隆形成實驗檢測EGFL7基因沉默對Hep-2細胞集落形成能力的影響.結果:成功構建EGFL7的慢病毒載體LV-sh EGFL7,包裝慢病毒,濃縮病毒懸液的滴度為5×108 TU/L.轉導siRNA的喉癌細胞EGFL7蛋白錶達陰性.EGFL7 siRNA轉導後喉癌胞體外侵襲能力下降.EGFL7基因沉默組細胞剋隆集落形成率與Hep-2組細胞及空載體組細胞比較,細胞剋隆集落形成率顯著減低.結論:成功構建人EGFL7基因RNAi慢病毒載體,EGFL7基因沉默對喉癌細胞體外侵襲有明顯的抑製作用.沉默EGFL7後,Hep-2細胞集落形成能力顯著減低,即下調EGFL7基因錶達可在一定程度上抑製喉癌細胞的錨著不依賴性增殖能力.
목적:구건류표피생장인자역7( EGFL7)기인RNA간우(RNAi)중조만병독,관찰기대후암체외침습적억제작용.방법:사선학정적EGFL7기인RNAi유효파서렬,합성파서렬적Oligo DNA,여함H1계동자화록색형광단백(GFP)적pLV재체련접산생LV-sh EGFL7만병독재체,PCR사선양성극륭,측서감정.용중조만병독체외전도후암세포,Western blot법검측후암세포EGFL7단백표체.Boyden침습소실법실험관찰전도shRNA후적후암세포침습능력적변화.이용극륭형성실험검측EGFL7기인침묵대Hep-2세포집락형성능력적영향.결과:성공구건EGFL7적만병독재체LV-sh EGFL7,포장만병독,농축병독현액적적도위5×108 TU/L.전도siRNA적후암세포EGFL7단백표체음성.EGFL7 siRNA전도후후암포체외침습능력하강.EGFL7기인침묵조세포극륭집락형성솔여Hep-2조세포급공재체조세포비교,세포극륭집락형성솔현저감저.결론:성공구건인EGFL7기인RNAi만병독재체,EGFL7기인침묵대후암세포체외침습유명현적억제작용.침묵EGFL7후,Hep-2세포집락형성능력현저감저,즉하조EGFL7기인표체가재일정정도상억제후암세포적묘착불의뢰성증식능력.
