浙江大学学报（理学版）
浙江大學學報（理學版）
절강대학학보（이학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY
2012年
5期
557-563
,共7页
汤甜甜%周亮%吉鹏飞%鲍文娜%龚兴国
湯甜甜%週亮%吉鵬飛%鮑文娜%龔興國
탕첨첨%주량%길붕비%포문나%공흥국
乙醇脱氢酶%毕赤酵母%酶活性%活性氧化物(ROS)%谷胱甘肽(GSH)%Akt
乙醇脫氫酶%畢赤酵母%酶活性%活性氧化物(ROS)%穀胱甘肽(GSH)%Akt
을순탈경매%필적효모%매활성%활성양화물(ROS)%곡광감태(GSH)%Akt
根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物,以人肝脏总RNA为模板,反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接,测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤酵母GS115;重组毕赤酵母工程菌经0.5％(υ/v)甲醇诱导72 h后目的蛋白以可溶形式表达,经DEAE- Sepharose FF纯化后蛋白酶活性可达8000 U·mg-1.同时构建重组质粒pCDNA3.1-ADHIB2转染HepG2人肝癌细胞,发现细胞内ROS/GSH水平降低,Akt磷酸化水平降低,细胞活性下降.为临床酒精中毒预防和治疗药物的研发以及ADH在肝脏肿瘤方面的研究提供了理论基础.
根據GeneBank中人乙醇脫氫酶ADH1B2基因序列設計引物,以人肝髒總RNA為模闆,反轉錄穫得人乙醇脫氫酶基因.將剋隆基因與錶達載體pPICZB連接,測序正確的pPICZB-ADH1B2電轉化畢赤酵母GS115;重組畢赤酵母工程菌經0.5％(υ/v)甲醇誘導72 h後目的蛋白以可溶形式錶達,經DEAE- Sepharose FF純化後蛋白酶活性可達8000 U·mg-1.同時構建重組質粒pCDNA3.1-ADHIB2轉染HepG2人肝癌細胞,髮現細胞內ROS/GSH水平降低,Akt燐痠化水平降低,細胞活性下降.為臨床酒精中毒預防和治療藥物的研髮以及ADH在肝髒腫瘤方麵的研究提供瞭理論基礎.
근거GeneBank중인을순탈경매ADH1B2기인서렬설계인물,이인간장총RNA위모판,반전록획득인을순탈경매기인.장극륭기인여표체재체pPICZB련접,측서정학적pPICZB-ADH1B2전전화필적효모GS115;중조필적효모공정균경0.5％(υ/v)갑순유도72 h후목적단백이가용형식표체,경DEAE- Sepharose FF순화후단백매활성가체8000 U·mg-1.동시구건중조질립pCDNA3.1-ADHIB2전염HepG2인간암세포,발현세포내ROS/GSH수평강저,Akt린산화수평강저,세포활성하강.위림상주정중독예방화치료약물적연발이급ADH재간장종류방면적연구제공료이론기출.
