CAJ | 학술논문

建立潮霉素(hygromycin,hyg)和新霉素(neomycin,neo)抗性基因转基因小鼠系,以获得两种抗性基因同时表达的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs),为条件性基因剔除或小鼠胚胎干细胞克隆的筛选创造条件.将pTK-hygR-pA,PGK-neoR-pA两个转录单元分别克隆至pBluescript载体中获得hygR-neoR双抗性基因表达质粒,以Kpn Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切,回收4245bp串联基因片段,经显微注射获得HygR-neoR转基因小鼠.PCR及Southern blot鉴定转基因小鼠基因型;RT-PCR检测hygR、neoR基因在转基因阳性小鼠组织及MEFs中的表达.经显微注射共获得7只转基因阳性小鼠(Founders,G0代),经交配繁育,建立了6个转基因小鼠系.RT-PCR检测其中5个转基因阳性小鼠系F1代杂合子成年雌性小鼠肝脏、卵巢组织中hygR、neoR基因的表达,发现hn30,hn33,hn66和hn67系阳性小鼠的1种或2种组织中有hygR、neoR的表达;RT-PCR检测发现hyg和neo抗性基因在从h30和hn66系分离培养的MEFs中表达.通过显微注射,建立了表达hyg-neo抗性基因的转基因小鼠系,转基因表达检测发现两个转基因小鼠系的胚胎成纤维细胞中表达双抗性基因.
건립조매소(hygromycin,hyg)화신매소(neomycin,neo)항성기인전기인소서계,이획득량충항성기인동시표체적소서배태성섬유세포(MEFs),위조건성기인척제혹소서배태간세포극륭적사선창조조건.장pTK-hygR-pA,PGK-neoR-pA량개전록단원분별극륭지pBluescript재체중획득hygR-neoR쌍항성기인표체질립,이Kpn Ⅰ화Xba Ⅰ쌍매절,회수4245bp천련기인편단,경현미주사획득HygR-neoR전기인소서.PCR급Southern blot감정전기인소서기인형;RT-PCR검측hygR、neoR기인재전기인양성소서조직급MEFs중적표체.경현미주사공획득7지전기인양성소서(Founders,G0대),경교배번육,건립료6개전기인소서계.RT-PCR검측기중5개전기인양성소서계F1대잡합자성년자성소서간장、란소조직중hygR、neoR기인적표체,발현hn30,hn33,hn66화hn67계양성소서적1충혹2충조직중유hygR、neoR적표체;RT-PCR검측발현hyg화neo항성기인재종h30화hn66계분리배양적MEFs중표체.통과현미주사,건립료표체hyg-neo항성기인적전기인소서계,전기인표체검측발현량개전기인소서계적배태성섬유세포중표체쌍항성기인.