华侨大学学报（自然科学版）
華僑大學學報（自然科學版）
화교대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HUAQIAO UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
2期
245-249
,共5页
贺淹才%刘爱花%张荣奎%刘治江
賀淹纔%劉愛花%張榮奎%劉治江
하엄재%류애화%장영규%류치강
几丁质酶%嗜麦芽窄食单胞菌%发酵培养%分子结构%生物信息学
幾丁質酶%嗜麥芽窄食單胞菌%髮酵培養%分子結構%生物信息學
궤정질매%기맥아착식단포균%발효배양%분자결구%생물신식학
从土壤中筛选出一株产几丁质酶的革兰氏阴性细菌,通过16S rDNA法对酶活力最高的菌株C进行鉴定,确定为嗜麦芽窄食单胞菌(S.maltophilia)菌株.通过单因素优化法和均匀设计法确定S.maltophilia产几丁质酶的最佳条件:在pH值为7.0的基础培养基中添加质量分数为1.0%的酵母膏、质量分数为0.5%的胶体几丁质,于180 r·min-1,30 ℃的摇床中培养60 h.对硫酸铵沉淀获得的粗酶进行酶学性质研究,结果表明,该几丁质酶的最适反应温度为50 ℃,最适反应pH值为7.2,在55 ℃以上的温度条件下容易失活.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,确定S.maltophilia几丁质酶的相对分子质量为6.8×103;以筛选的S.maltophilia菌株的总DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出几丁质酶DNA测序;应用生物信息学手段推导S.maltophilia几丁质酶为分泌型蛋白酶,预测其等电点pI值为5.42,相对分子质量为6.8×103(与实验纯化的酶蛋白电泳结果一致).预测该酶氨基酸序列具有信号肽区(氨基酸残基1～41)、Ⅲ型几丁质结合区(残基47～92)、多囊肾病域(107～194)、类纤维连接蛋白Ⅲ型区(Fn3,201～278)和18家族糖基水解域等5个结构功能区,5个区域被富含Ala,Gly,Pro,Ser和Thr的短序列连接起来;在第400～500个氨基酸残基间有一个螺旋结构.
從土壤中篩選齣一株產幾丁質酶的革蘭氏陰性細菌,通過16S rDNA法對酶活力最高的菌株C進行鑒定,確定為嗜麥芽窄食單胞菌(S.maltophilia)菌株.通過單因素優化法和均勻設計法確定S.maltophilia產幾丁質酶的最佳條件:在pH值為7.0的基礎培養基中添加質量分數為1.0%的酵母膏、質量分數為0.5%的膠體幾丁質,于180 r·min-1,30 ℃的搖床中培養60 h.對硫痠銨沉澱穫得的粗酶進行酶學性質研究,結果錶明,該幾丁質酶的最適反應溫度為50 ℃,最適反應pH值為7.2,在55 ℃以上的溫度條件下容易失活.通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分析,確定S.maltophilia幾丁質酶的相對分子質量為6.8×103;以篩選的S.maltophilia菌株的總DNA為模闆,利用聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增齣幾丁質酶DNA測序;應用生物信息學手段推導S.maltophilia幾丁質酶為分泌型蛋白酶,預測其等電點pI值為5.42,相對分子質量為6.8×103(與實驗純化的酶蛋白電泳結果一緻).預測該酶氨基痠序列具有信號肽區(氨基痠殘基1～41)、Ⅲ型幾丁質結閤區(殘基47～92)、多囊腎病域(107～194)、類纖維連接蛋白Ⅲ型區(Fn3,201～278)和18傢族糖基水解域等5箇結構功能區,5箇區域被富含Ala,Gly,Pro,Ser和Thr的短序列連接起來;在第400～500箇氨基痠殘基間有一箇螺鏇結構.
종토양중사선출일주산궤정질매적혁란씨음성세균,통과16S rDNA법대매활력최고적균주C진행감정,학정위기맥아착식단포균(S.maltophilia)균주.통과단인소우화법화균균설계법학정S.maltophilia산궤정질매적최가조건:재pH치위7.0적기출배양기중첨가질량분수위1.0%적효모고、질량분수위0.5%적효체궤정질,우180 r·min-1,30 ℃적요상중배양60 h.대류산안침정획득적조매진행매학성질연구,결과표명,해궤정질매적최괄반응온도위50 ℃,최괄반응pH치위7.2,재55 ℃이상적온도조건하용역실활.통과취병희선알응효전영분석,학정S.maltophilia궤정질매적상대분자질량위6.8×103;이사선적S.maltophilia균주적총DNA위모판,이용취합매련식반응(PCR)확증출궤정질매DNA측서;응용생물신식학수단추도S.maltophilia궤정질매위분비형단백매,예측기등전점pI치위5.42,상대분자질량위6.8×103(여실험순화적매단백전영결과일치).예측해매안기산서렬구유신호태구(안기산잔기1～41)、Ⅲ형궤정질결합구(잔기47～92)、다낭신병역(107～194)、류섬유련접단백Ⅲ형구(Fn3,201～278)화18가족당기수해역등5개결구공능구,5개구역피부함Ala,Gly,Pro,Ser화Thr적단서렬련접기래;재제400～500개안기산잔기간유일개라선결구.
