CAJ | 학술논문

构建Bcr/Abl-Abd原核表达载体,并表达、观察对白血病细胞K562的影响.以慢性白血病PGD210质粒为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增出Abd编码区序列,克隆入pMD18t载体,经酶切测序鉴定正确.再通过酶切重组克隆入原核表达载体pET32a,构建pET32a-Abd重组表达质粒,经酶切、测序鉴定,序列、读码框均正确.通过转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,纯化.结果PCR扩增出特异性的501bp的目的片断,以此构建的重组质粒pET32a-Abd能够在上清中表达约36.6 kd的目的蛋白,Westem blot鉴定为特异表达.证明成功构建了原核表达载体pE732a-Abd,并表达在上清中,表达蛋白约占菌体总蛋白的6%,纯化后达到74.3%,Westem blot检测为特异性表达,为进一步研究该蛋白对慢性白血病细胞的作用奠定了分子基础.
구건Bcr/Abl-Abd원핵표체재체,병표체、관찰대백혈병세포K562적영향.이만성백혈병PGD210질립위모판,응용취합매련반응(PCR)확증출Abd편마구서렬,극륭입pMD18t재체,경매절측서감정정학.재통과매절중조극륭입원핵표체재체pET32a,구건pET32a-Abd중조표체질립,경매절、측서감정,서렬、독마광균정학.통과전화E.coli BL21(DE3),경IPTG유도표체,순화.결과PCR확증출특이성적501bp적목적편단,이차구건적중조질립pET32a-Abd능구재상청중표체약36.6 kd적목적단백,Westem blot감정위특이표체.증명성공구건료원핵표체재체pE732a-Abd,병표체재상청중,표체단백약점균체총단백적6%,순화후체도74.3%,Westem blot검측위특이성표체,위진일보연구해단백대만성백혈병세포적작용전정료분자기출.