生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2008年
4期
20-22
,共3页
张慧瑛%张玉静%胡薇%明宇%张蕾%郝军元
張慧瑛%張玉靜%鬍薇%明宇%張蕾%郝軍元
장혜영%장옥정%호미%명우%장뢰%학군원
凋亡素融合蛋白%TAT%原核表达%抗体
凋亡素融閤蛋白%TAT%原覈錶達%抗體
조망소융합단백%TAT%원핵표체%항체
目的:为制备凋亡素重组蛋白抗体,首先获得凋亡素重组蛋白融合基因LTA,而且通过原核表达系统表达重组蛋白并制备其抗体,为进一步利用凋亡素重组蛋白导向治疗肿瘤的检测奠定基础.方法:应用重叠延伸的基因融合技术将LHRH(黄体生成激素释放激素)基因、TAT(HIV-1反式转录激活因子)基因和凋亡素基因重组,构建成凋亡素重组蛋白原核表达载体pET-28a-LTA,随后将表达质粒转入BL21菌株,经IPTG诱导表达重组融合蛋白,将已表达的重组蛋白通过Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化,并制备LTA凋亡素重组蛋白抗体.结果:表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,LTA蛋白融合基因获得高效表达,凝胶薄层扫描分析表明表达蛋白占菌体蛋白12.6%.LTA蛋白经Ni-NTA亲和色谱柱柱纯化,以纯化蛋白为抗原免疫獭兔制备凋亡素重组蛋白抗血清.结果表明抗体的效价为1: 12800.结论:应用重叠延伸的基因融合技术获得凋亡素重组蛋白融合基因LTA,通过原核表达系统表达重组蛋白并制备其抗体.
目的:為製備凋亡素重組蛋白抗體,首先穫得凋亡素重組蛋白融閤基因LTA,而且通過原覈錶達繫統錶達重組蛋白併製備其抗體,為進一步利用凋亡素重組蛋白導嚮治療腫瘤的檢測奠定基礎.方法:應用重疊延伸的基因融閤技術將LHRH(黃體生成激素釋放激素)基因、TAT(HIV-1反式轉錄激活因子)基因和凋亡素基因重組,構建成凋亡素重組蛋白原覈錶達載體pET-28a-LTA,隨後將錶達質粒轉入BL21菌株,經IPTG誘導錶達重組融閤蛋白,將已錶達的重組蛋白通過Ni-NTA親和色譜柱進行純化,併製備LTA凋亡素重組蛋白抗體.結果:錶達產物經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測,LTA蛋白融閤基因穫得高效錶達,凝膠薄層掃描分析錶明錶達蛋白佔菌體蛋白12.6%.LTA蛋白經Ni-NTA親和色譜柱柱純化,以純化蛋白為抗原免疫獺兔製備凋亡素重組蛋白抗血清.結果錶明抗體的效價為1: 12800.結論:應用重疊延伸的基因融閤技術穫得凋亡素重組蛋白融閤基因LTA,通過原覈錶達繫統錶達重組蛋白併製備其抗體.
목적:위제비조망소중조단백항체,수선획득조망소중조단백융합기인LTA,이차통과원핵표체계통표체중조단백병제비기항체,위진일보이용조망소중조단백도향치료종류적검측전정기출.방법:응용중첩연신적기인융합기술장LHRH(황체생성격소석방격소)기인、TAT(HIV-1반식전록격활인자)기인화조망소기인중조,구건성조망소중조단백원핵표체재체pET-28a-LTA,수후장표체질립전입BL21균주,경IPTG유도표체중조융합단백,장이표체적중조단백통과Ni-NTA친화색보주진행순화,병제비LTA조망소중조단백항체.결과:표체산물경취병희선알응효전영검측,LTA단백융합기인획득고효표체,응효박층소묘분석표명표체단백점균체단백12.6%.LTA단백경Ni-NTA친화색보주주순화,이순화단백위항원면역달토제비조망소중조단백항혈청.결과표명항체적효개위1: 12800.결론:응용중첩연신적기인융합기술획득조망소중조단백융합기인LTA,통과원핵표체계통표체중조단백병제비기항체.
