中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2009年
3期
200-206
,共7页
钟晓琴%刘美英%黄云艳%贾春平%金庆辉%赵建龙%李凤民
鐘曉琴%劉美英%黃雲豔%賈春平%金慶輝%趙建龍%李鳳民
종효금%류미영%황운염%가춘평%금경휘%조건룡%리봉민
辣根过氧化物酶%免疫酶技术%分光光度法基金资项目%国家科技部"863"计划项目(No.2006AA3Z334)%上海市科委项目(No.0752nm019)
辣根過氧化物酶%免疫酶技術%分光光度法基金資項目%國傢科技部"863"計劃項目(No.2006AA3Z334)%上海市科委項目(No.0752nm019)
랄근과양화물매%면역매기술%분광광도법기금자항목%국가과기부"863"계화항목(No.2006AA3Z334)%상해시과위항목(No.0752nm019)
目的 研究酶标纳米金探针的制各条件,并构建利用酶标纳米金探针检测蛋白质的检测体系,实现对蛋白质的高灵敏度检测.方法 首先标记捕获抗体的磁珠探针、抗原及标记检测抗体和辣根过氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,SA-HRP)的纳米金探针(AuNP probes)进行免疫反应形成三明治结构,然后利用磁力分离器收集三明治结构,再加入四甲基联苯胺(Tetrabenzidine,TMB)溶液发生酶促显色反应,最后在450 nm处进行分光光度检测,从而间接测定蛋白质含量.结果 通过一系列优化实验建立检测体系,具体为:纳米金探针重悬液确定为50 mmol Tris(pH7.8,1.25%蔗糖,0.2%BSA,0.05%PEG,0.05%PVP,0.15% Tween20):检测体系中纳米金的最适加入量为3 μl;2步孵育最适时间依次为1 h和45 min.使用该方法检测并绘制癌胚抗原(CEA)标准曲线,表明CEA浓度在250 pg/ml～25 ng/ml区间时线性关系良好,R2为0.991.通过灵敏度实验表明该检测体系的最低检测灵敏度为25 pg/ml,而传统ELISA方法的检测灵敏度仅为1.65 ng/ml.结论 酶标纳米金探针检测体系实现了通过普通光学仪器进行高灵敏度蛋白质检测的目标,是一种很有发展前景的蛋白质检测技术.
目的 研究酶標納米金探針的製各條件,併構建利用酶標納米金探針檢測蛋白質的檢測體繫,實現對蛋白質的高靈敏度檢測.方法 首先標記捕穫抗體的磁珠探針、抗原及標記檢測抗體和辣根過氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,SA-HRP)的納米金探針(AuNP probes)進行免疫反應形成三明治結構,然後利用磁力分離器收集三明治結構,再加入四甲基聯苯胺(Tetrabenzidine,TMB)溶液髮生酶促顯色反應,最後在450 nm處進行分光光度檢測,從而間接測定蛋白質含量.結果 通過一繫列優化實驗建立檢測體繫,具體為:納米金探針重懸液確定為50 mmol Tris(pH7.8,1.25%蔗糖,0.2%BSA,0.05%PEG,0.05%PVP,0.15% Tween20):檢測體繫中納米金的最適加入量為3 μl;2步孵育最適時間依次為1 h和45 min.使用該方法檢測併繪製癌胚抗原(CEA)標準麯線,錶明CEA濃度在250 pg/ml～25 ng/ml區間時線性關繫良好,R2為0.991.通過靈敏度實驗錶明該檢測體繫的最低檢測靈敏度為25 pg/ml,而傳統ELISA方法的檢測靈敏度僅為1.65 ng/ml.結論 酶標納米金探針檢測體繫實現瞭通過普通光學儀器進行高靈敏度蛋白質檢測的目標,是一種很有髮展前景的蛋白質檢測技術.
목적 연구매표납미금탐침적제각조건,병구건이용매표납미금탐침검측단백질적검측체계,실현대단백질적고령민도검측.방법 수선표기포획항체적자주탐침、항원급표기검측항체화랄근과양화물매(Streptavidin-peroxidase,SA-HRP)적납미금탐침(AuNP probes)진행면역반응형성삼명치결구,연후이용자력분리기수집삼명치결구,재가입사갑기련분알(Tetrabenzidine,TMB)용액발생매촉현색반응,최후재450 nm처진행분광광도검측,종이간접측정단백질함량.결과 통과일계렬우화실험건립검측체계,구체위:납미금탐침중현액학정위50 mmol Tris(pH7.8,1.25%자당,0.2%BSA,0.05%PEG,0.05%PVP,0.15% Tween20):검측체계중납미금적최괄가입량위3 μl;2보부육최괄시간의차위1 h화45 min.사용해방법검측병회제암배항원(CEA)표준곡선,표명CEA농도재250 pg/ml～25 ng/ml구간시선성관계량호,R2위0.991.통과령민도실험표명해검측체계적최저검측령민도위25 pg/ml,이전통ELISA방법적검측령민도부위1.65 ng/ml.결론 매표납미금탐침검측체계실현료통과보통광학의기진행고령민도단백질검측적목표,시일충흔유발전전경적단백질검측기술.
