中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
4期
178-183
,共6页
杜景娇%薛强%邹明强%郭浩%滕文锋
杜景嬌%薛彊%鄒明彊%郭浩%滕文鋒
두경교%설강%추명강%곽호%등문봉
环介导等温扩增技术%新城疫病毒%聚合酶链反应%LAMP实时浊度仪
環介導等溫擴增技術%新城疫病毒%聚閤酶鏈反應%LAMP實時濁度儀
배개도등온확증기술%신성역병독%취합매련반응%LAMP실시탁도의
本研究利用3种方法对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行检测,并对这3种检测方法的灵敏度和特异性作出比较.根据新城疫病毒的融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,利用水浴LAMP法、PCR及LAMP实时浊度仪进行检测.通过对恒温水浴中的反应温度、反应时间及反应液中Mg2浓度进行优化获得最佳反应条件,结果用凝胶电泳分析；用优化的温度进行LAMP实时浊度仪检测,同时都与PCR方法进行比较.结果显示,获得了最佳反应条件,水浴LAMP方法最低检测限是1.58 pg,比PCR高100倍,而LAMP实时浊度仪检测灵敏度比水浴LAMP方法高10倍,最低检测限是0.158 pg.3种方法对其他非新城疫病毒均无检出.结果表明,新城疫病毒水浴LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,有望在核酸扩增领域取代PCR技术,LAMP浊度仪法检测灵敏度更高,但是所需仪器和试剂比较昂贵.
本研究利用3種方法對新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)進行檢測,併對這3種檢測方法的靈敏度和特異性作齣比較.根據新城疫病毒的融閤蛋白基因(F基因)設計閤成6條特異性引物,利用水浴LAMP法、PCR及LAMP實時濁度儀進行檢測.通過對恆溫水浴中的反應溫度、反應時間及反應液中Mg2濃度進行優化穫得最佳反應條件,結果用凝膠電泳分析；用優化的溫度進行LAMP實時濁度儀檢測,同時都與PCR方法進行比較.結果顯示,穫得瞭最佳反應條件,水浴LAMP方法最低檢測限是1.58 pg,比PCR高100倍,而LAMP實時濁度儀檢測靈敏度比水浴LAMP方法高10倍,最低檢測限是0.158 pg.3種方法對其他非新城疫病毒均無檢齣.結果錶明,新城疫病毒水浴LAMP檢測方法速度快、不需要高精密的儀器,而且具有靈敏度高、特異性彊、操作簡單等特點,有望在覈痠擴增領域取代PCR技術,LAMP濁度儀法檢測靈敏度更高,但是所需儀器和試劑比較昂貴.
본연구이용3충방법대신성역병독(Newcastle disease virus,NDV)진행검측,병대저3충검측방법적령민도화특이성작출비교.근거신성역병독적융합단백기인(F기인)설계합성6조특이성인물,이용수욕LAMP법、PCR급LAMP실시탁도의진행검측.통과대항온수욕중적반응온도、반응시간급반응액중Mg2농도진행우화획득최가반응조건,결과용응효전영분석；용우화적온도진행LAMP실시탁도의검측,동시도여PCR방법진행비교.결과현시,획득료최가반응조건,수욕LAMP방법최저검측한시1.58 pg,비PCR고100배,이LAMP실시탁도의검측령민도비수욕LAMP방법고10배,최저검측한시0.158 pg.3충방법대기타비신성역병독균무검출.결과표명,신성역병독수욕LAMP검측방법속도쾌、불수요고정밀적의기,이차구유령민도고、특이성강、조작간단등특점,유망재핵산확증영역취대PCR기술,LAMP탁도의법검측령민도경고,단시소수의기화시제비교앙귀.
