北京大学学报
北京大學學報
북경대학학보
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS PEKINENSIS
2000年
6期
802-807
,共6页
尿激酶原%大肠杆菌%稀有密码子%BL21-CodonPlusTM-RIL%dnaY基因
尿激酶原%大腸桿菌%稀有密碼子%BL21-CodonPlusTM-RIL%dnaY基因
뇨격매원%대장간균%희유밀마자%BL21-CodonPlusTM-RIL%dnaY기인
用限制性内切酶将人尿激酶原cDNA酶切成一系列基因片段,并分别在大肠杆菌中表达.发现其中1个富含大肠杆菌稀有密码子AGG(精氨酸)的片段表达量低,成为人尿激酶原cDNA在E.coli中高效表达的限制因素.将富含AGG(精氨酸)的片段在E.coli BL21-CodonPlusTM-RIL中表达,通过该菌株引入dnaY基因(即tRNAagg/aga(Arg))使该片段的表达量提高了10倍.最后用同样的方法提高全长人尿激酶原cDNA在大肠杆菌中的表达量,使其表达量达到全菌蛋白的5%.
用限製性內切酶將人尿激酶原cDNA酶切成一繫列基因片段,併分彆在大腸桿菌中錶達.髮現其中1箇富含大腸桿菌稀有密碼子AGG(精氨痠)的片段錶達量低,成為人尿激酶原cDNA在E.coli中高效錶達的限製因素.將富含AGG(精氨痠)的片段在E.coli BL21-CodonPlusTM-RIL中錶達,通過該菌株引入dnaY基因(即tRNAagg/aga(Arg))使該片段的錶達量提高瞭10倍.最後用同樣的方法提高全長人尿激酶原cDNA在大腸桿菌中的錶達量,使其錶達量達到全菌蛋白的5%.
용한제성내절매장인뇨격매원cDNA매절성일계렬기인편단,병분별재대장간균중표체.발현기중1개부함대장간균희유밀마자AGG(정안산)적편단표체량저,성위인뇨격매원cDNA재E.coli중고효표체적한제인소.장부함AGG(정안산)적편단재E.coli BL21-CodonPlusTM-RIL중표체,통과해균주인입dnaY기인(즉tRNAagg/aga(Arg))사해편단적표체량제고료10배.최후용동양적방법제고전장인뇨격매원cDNA재대장간균중적표체량,사기표체량체도전균단백적5%.
