生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2005年
3期
430-434
,共5页
刘堰%苏畅%胡应和%欧阳克清%蔡绍皙
劉堰%囌暢%鬍應和%歐暘剋清%蔡紹皙
류언%소창%호응화%구양극청%채소석
纯化%高效分泌表达%突变型人白介素-2%毕赤酵母
純化%高效分泌錶達%突變型人白介素-2%畢赤酵母
순화%고효분비표체%돌변형인백개소-2%필적효모
在以前的研究中,通过蛋白质工程技术获得了三突变体白细胞介素-2基因(编码125位半胱氨酸→丙氨酸;18位亮氨酸→蛋氨酸;19位亮氨酸→丝氨酸),并在毕赤酵母中加以表达.进一步优化表达条件,其最适诱导条件:80%以上的通气,诱导2 d,初始pH6.0,甲醇终浓度为1.0%.在上述条件下表达量占菌体总蛋白的30%以上,大约200mg/L.建立了一套从毕赤酵母表达上清中分离纯化分泌型表达蛋白IL-2的方法,经离心,超滤浓缩,强阳离子交换S柱和分子筛层析得到纯化的突变型和野生型IL-2;其得率为27%,纯度达电泳纯并且HPLC检测只有一个峰.纯化的突变蛋白对CTLL-2细胞具有刺激性;与野生型IL-2相比,在各种温度条件下储存的突变蛋白保留有更高的活性;突变型IL-2的活力是野生型的4～5倍,具有更高的利用价值.
在以前的研究中,通過蛋白質工程技術穫得瞭三突變體白細胞介素-2基因(編碼125位半胱氨痠→丙氨痠;18位亮氨痠→蛋氨痠;19位亮氨痠→絲氨痠),併在畢赤酵母中加以錶達.進一步優化錶達條件,其最適誘導條件:80%以上的通氣,誘導2 d,初始pH6.0,甲醇終濃度為1.0%.在上述條件下錶達量佔菌體總蛋白的30%以上,大約200mg/L.建立瞭一套從畢赤酵母錶達上清中分離純化分泌型錶達蛋白IL-2的方法,經離心,超濾濃縮,彊暘離子交換S柱和分子篩層析得到純化的突變型和野生型IL-2;其得率為27%,純度達電泳純併且HPLC檢測隻有一箇峰.純化的突變蛋白對CTLL-2細胞具有刺激性;與野生型IL-2相比,在各種溫度條件下儲存的突變蛋白保留有更高的活性;突變型IL-2的活力是野生型的4～5倍,具有更高的利用價值.
재이전적연구중,통과단백질공정기술획득료삼돌변체백세포개소-2기인(편마125위반광안산→병안산;18위량안산→단안산;19위량안산→사안산),병재필적효모중가이표체.진일보우화표체조건,기최괄유도조건:80%이상적통기,유도2 d,초시pH6.0,갑순종농도위1.0%.재상술조건하표체량점균체총단백적30%이상,대약200mg/L.건립료일투종필적효모표체상청중분리순화분비형표체단백IL-2적방법,경리심,초려농축,강양리자교환S주화분자사층석득도순화적돌변형화야생형IL-2;기득솔위27%,순도체전영순병차HPLC검측지유일개봉.순화적돌변단백대CTLL-2세포구유자격성;여야생형IL-2상비,재각충온도조건하저존적돌변단백보류유경고적활성;돌변형IL-2적활력시야생형적4～5배,구유경고적이용개치.
