细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2005年
4期
435-436,441
,共3页
王锦之%陈巨星%杨忠%周宇荀%马昱澍%魏东芝
王錦之%陳巨星%楊忠%週宇荀%馬昱澍%魏東芝
왕금지%진거성%양충%주우순%마욱주%위동지
TAT蛋白转导结构域%载体构建%增强性绿色荧光蛋白%Western blot
TAT蛋白轉導結構域%載體構建%增彊性綠色熒光蛋白%Western blot
TAT단백전도결구역%재체구건%증강성록색형광단백%Western blot
目的:构建一个全新的分泌型TAT蛋白转导结构域基因哺乳动物细胞融合表达载体并对融合蛋白的表达进行分析.方法: 依照编码TAT-PTD11肽及所引入的BamH I酶识别序列和增强性绿色荧光蛋白N端7个氨基酸的碱基序列合成了3条引物, 以egfp基因为模板通过依次3轮PCR扩增得到tat-egfp融合基因, 该基因片段以Sfi I和Hind Ⅲ双酶切后插入哺乳动物细胞表达载体pSectagA, 构建成重组载体pSecTAT-m-egfp, BamH I单酶切后该载体自连, 即得到可通用的真核表达载体pSecTAT-m, 重组质粒pSecTAT-m-egfp转染HEK293细胞, 融合蛋白的表达用Western blot分析.结果: 酶切及测序证实表达载体pSecTAT-m构建成功, Western blot表明TAT-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中获得表达并分泌到细胞培养液中.结论: 成功地构建了分泌型TAT蛋白转导结构域基因的哺乳动物细胞融合表达载体, 为更充分发挥TAT蛋白转导结构域在蛋白质功能及疾病治疗研究中的应用打下了基础.
目的:構建一箇全新的分泌型TAT蛋白轉導結構域基因哺乳動物細胞融閤錶達載體併對融閤蛋白的錶達進行分析.方法: 依照編碼TAT-PTD11肽及所引入的BamH I酶識彆序列和增彊性綠色熒光蛋白N耑7箇氨基痠的堿基序列閤成瞭3條引物, 以egfp基因為模闆通過依次3輪PCR擴增得到tat-egfp融閤基因, 該基因片段以Sfi I和Hind Ⅲ雙酶切後插入哺乳動物細胞錶達載體pSectagA, 構建成重組載體pSecTAT-m-egfp, BamH I單酶切後該載體自連, 即得到可通用的真覈錶達載體pSecTAT-m, 重組質粒pSecTAT-m-egfp轉染HEK293細胞, 融閤蛋白的錶達用Western blot分析.結果: 酶切及測序證實錶達載體pSecTAT-m構建成功, Western blot錶明TAT-EGFP融閤蛋白在HEK293細胞中穫得錶達併分泌到細胞培養液中.結論: 成功地構建瞭分泌型TAT蛋白轉導結構域基因的哺乳動物細胞融閤錶達載體, 為更充分髮揮TAT蛋白轉導結構域在蛋白質功能及疾病治療研究中的應用打下瞭基礎.
목적:구건일개전신적분비형TAT단백전도결구역기인포유동물세포융합표체재체병대융합단백적표체진행분석.방법: 의조편마TAT-PTD11태급소인입적BamH I매식별서렬화증강성록색형광단백N단7개안기산적감기서렬합성료3조인물, 이egfp기인위모판통과의차3륜PCR확증득도tat-egfp융합기인, 해기인편단이Sfi I화Hind Ⅲ쌍매절후삽입포유동물세포표체재체pSectagA, 구건성중조재체pSecTAT-m-egfp, BamH I단매절후해재체자련, 즉득도가통용적진핵표체재체pSecTAT-m, 중조질립pSecTAT-m-egfp전염HEK293세포, 융합단백적표체용Western blot분석.결과: 매절급측서증실표체재체pSecTAT-m구건성공, Western blot표명TAT-EGFP융합단백재HEK293세포중획득표체병분비도세포배양액중.결론: 성공지구건료분비형TAT단백전도결구역기인적포유동물세포융합표체재체, 위경충분발휘TAT단백전도결구역재단백질공능급질병치료연구중적응용타하료기출.
