CAJ | 학술논문

目的利用腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),不同血清型对不同宿主细胞转导率存在差异的特点,探讨不同血清型AAV对耳蜗各种细胞尤其是毛细胞的转染率,进一步探讨高转染率的血清型AAV转导神经胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对卡那霉素致鼠耳蜗损害的保护作用.方法采用不同血清型的AAV携载标记基因绿荧光蛋白EGFP,微注射到鼠耳蜗,荧光显微镜检测耳蜗内EGFP的表达分布和强度.应用筛选出的高转导率的血清型AAV构建携载GDNF的载体,微注射到卡那霉素耳聋模型鼠耳蜗内,经脑干诱发电位检测听力阈值,ELISA法检测耳蜗外淋巴液GDNF蛋白表达,免疫组化检测GDNF蛋白在细胞内的表达,耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞染色检测细胞的凋亡.结果荧光显微镜结果显示七种AAV血清型转导的EGFP均可分别在耳蜗的不同细胞内表达,其中AAV3-EGFP特异性在耳蜗内毛细胞表达,AAV1-EGFP在耳蜗内毛细胞等高效表达.在卡那霉素耳聋模型鼠中,注射AAV1-GDNF的耳蜗听力阈值比对侧耳低,GDNF在注射耳蜗内的表达水平比对照组高,其在耳蜗内的表达分布与EGFP的表达相似,治疗耳的耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞比对照耳幸存多.结论作为耳蜗基因治疗的载体,AAV血清型具有高转导率.AAV1型载体转导的GDNF保护了耳蜗功能,可以作为一个有价值的方法预防氨基糖甙类抗生素导致的耳聋.本研究为今后耳蜗毛细胞的进一步研究,以及对由于单基因突变导致的隐性遗传性耳聋开展耳蜗的基因治疗提供依据.
목적 이용선상관병독(adeno-associated virus,AAV),불동혈청형대불동숙주세포전도솔존재차이적특점,탐토불동혈청형AAV대이와각충세포우기시모세포적전염솔,진일보탐토고전염솔적혈청형AAV전도신경효질세포원성신경영양인자(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)대잡나매소치서이와손해적보호작용.방법 채용불동혈청형적AAV휴재표기기인록형광단백EGFP,미주사도서이와,형광현미경검측이와내EGFP적표체분포화강도.응용사선출적고전도솔적혈청형AAV구건휴재GDNF적재체,미주사도잡나매소이롱모형서이와내,경뇌간유발전위검측은력역치,ELISA법검측이와외림파액GDNF단백표체,면역조화검측GDNF단백재세포내적표체,이와모세포화라선신경절세포염색검측세포적조망.결과 형광현미경결과현시칠충AAV혈청형전도적EGFP균가분별재이와적불동세포내표체,기중AAV3-EGFP특이성재이와내모세포표체,AAV1-EGFP재이와내모세포등고효표체.재잡나매소이롱모형서중,주사AAV1-GDNF적이와은력역치비대측이저,GDNF재주사이와내적표체수평비대조조고,기재이와내적표체분포여EGFP적표체상사,치료이적이와모세포화라선신경절세포비대조이행존다.결론 작위이와기인치료적재체,AAV혈청형구유고전도솔.AAV1형재체전도적GDNF보호료이와공능,가이작위일개유개치적방법예방안기당대류항생소도치적이롱.본연구위금후이와모세포적진일보연구,이급대유우단기인돌변도치적은성유전성이롱개전이와적기인치료제공의거.