畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2008年
1期
113-116
,共4页
霍桂桃%郑杰%徐广贤%尹晓敏%周向梅%杨建民%赵德明
霍桂桃%鄭傑%徐廣賢%尹曉敏%週嚮梅%楊建民%趙德明
곽계도%정걸%서엄현%윤효민%주향매%양건민%조덕명
绵羊%转染%朊蛋白%绿色荧光蛋白
綿羊%轉染%朊蛋白%綠色熒光蛋白
면양%전염%원단백%록색형광단백
构建了携带绵羊朊蛋白基因(PRNP)的重组真核转染质粒,通过脂质体转染试剂将其转染至神经胶质瘤细胞(C6),以期为进一步研究绵羊朊蛋白的生理功能和从细胞水平研究朊蛋白疾病的发病机制奠定基础.采用PCR扩增目的基因序列,纯化后将其克隆到带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,对重组质粒pEGFP-PRNP做酶切鉴定.而后采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到C6细胞,荧光显微镜观察.经鉴定,绵羊PRNP基因已克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,成功地构建了重组pEGFP-PRNP质粒,并可稳定地在C6细胞中表达.本研究为外源朊蛋白在细胞中表达提供了平台,为进一步在细胞水平研究朊病毒疾病奠定了基础.
構建瞭攜帶綿羊朊蛋白基因(PRNP)的重組真覈轉染質粒,通過脂質體轉染試劑將其轉染至神經膠質瘤細胞(C6),以期為進一步研究綿羊朊蛋白的生理功能和從細胞水平研究朊蛋白疾病的髮病機製奠定基礎.採用PCR擴增目的基因序列,純化後將其剋隆到帶有增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)報告基因的真覈錶達載體pEGFP-N1中,對重組質粒pEGFP-PRNP做酶切鑒定.而後採用暘離子脂質體轉染法將重組質粒轉染到C6細胞,熒光顯微鏡觀察.經鑒定,綿羊PRNP基因已剋隆到真覈錶達載體pEGFP-N1中,成功地構建瞭重組pEGFP-PRNP質粒,併可穩定地在C6細胞中錶達.本研究為外源朊蛋白在細胞中錶達提供瞭平檯,為進一步在細胞水平研究朊病毒疾病奠定瞭基礎.
구건료휴대면양원단백기인(PRNP)적중조진핵전염질립,통과지질체전염시제장기전염지신경효질류세포(C6),이기위진일보연구면양원단백적생리공능화종세포수평연구원단백질병적발병궤제전정기출.채용PCR확증목적기인서렬,순화후장기극륭도대유증강형록색형광단백(EGFP)보고기인적진핵표체재체pEGFP-N1중,대중조질립pEGFP-PRNP주매절감정.이후채용양리자지질체전염법장중조질립전염도C6세포,형광현미경관찰.경감정,면양PRNP기인이극륭도진핵표체재체pEGFP-N1중,성공지구건료중조pEGFP-PRNP질립,병가은정지재C6세포중표체.본연구위외원원단백재세포중표체제공료평태,위진일보재세포수평연구원병독질병전정료기출.
