南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
6期
915-918
,共4页
龚伟%李洁%王允玲%南清振%姜泊%张宏权
龔偉%李潔%王允玲%南清振%薑泊%張宏權
공위%리길%왕윤령%남청진%강박%장굉권
Migfilin%基因克隆%蛋白表达%多克隆抗体%大肠癌
Migfilin%基因剋隆%蛋白錶達%多剋隆抗體%大腸癌
Migfilin%기인극륭%단백표체%다극륭항체%대장암
目的 克隆migfilin-N末端基因并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物并进行多克隆抗体制备,为研究migfilin与大肠癌的关系奠定基础.方法 根据人migfilin全长cDNA系列,设计PCR引物,以人大肠癌cDNA文库为模板克隆migfilin-N末端基凶,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中,经EcoRI/XhoI双酶切鉴定后,进行DNA序列测定.GST-migfilin-N融合蛋白在硫代半乳糖苷诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达.利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-migfilin-N融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体.并用纯化的抗migfilin多克隆抗体在不同的细胞株中用Western blotting检测migfilin的表达.结果 成功克隆了migfilin-N端基因片段,表达并纯化了GST-migfilin-N融合蛋白,制备了migfilin特异性抗体.Western blotting检测migfilin在不同细胞株中的表达,结果显示migfilin在肺癌及大肠癌细胞株中高表达.结论 migfilin特异性抗体制备成功,为深入探讨migfilin在大肠癌中的作用奠定了基础.
目的 剋隆migfilin-N末耑基因併使其在大腸桿菌中高效錶達,純化基因錶達產物併進行多剋隆抗體製備,為研究migfilin與大腸癌的關繫奠定基礎.方法 根據人migfilin全長cDNA繫列,設計PCR引物,以人大腸癌cDNA文庫為模闆剋隆migfilin-N末耑基兇,將擴增產物剋隆至大腸桿菌錶達載體pGEX-4T-1中,經EcoRI/XhoI雙酶切鑒定後,進行DNA序列測定.GST-migfilin-N融閤蛋白在硫代半乳糖苷誘導下在大腸桿菌BL21中得到錶達.利用穀胱甘肽親和層析純化融閤蛋白,用純化的GST-migfilin-N融閤蛋白免疫傢兔製備多剋隆抗體.併用純化的抗migfilin多剋隆抗體在不同的細胞株中用Western blotting檢測migfilin的錶達.結果 成功剋隆瞭migfilin-N耑基因片段,錶達併純化瞭GST-migfilin-N融閤蛋白,製備瞭migfilin特異性抗體.Western blotting檢測migfilin在不同細胞株中的錶達,結果顯示migfilin在肺癌及大腸癌細胞株中高錶達.結論 migfilin特異性抗體製備成功,為深入探討migfilin在大腸癌中的作用奠定瞭基礎.
목적 극륭migfilin-N말단기인병사기재대장간균중고효표체,순화기인표체산물병진행다극륭항체제비,위연구migfilin여대장암적관계전정기출.방법 근거인migfilin전장cDNA계렬,설계PCR인물,이인대장암cDNA문고위모판극륭migfilin-N말단기흉,장확증산물극륭지대장간균표체재체pGEX-4T-1중,경EcoRI/XhoI쌍매절감정후,진행DNA서렬측정.GST-migfilin-N융합단백재류대반유당감유도하재대장간균BL21중득도표체.이용곡광감태친화층석순화융합단백,용순화적GST-migfilin-N융합단백면역가토제비다극륭항체.병용순화적항migfilin다극륭항체재불동적세포주중용Western blotting검측migfilin적표체.결과 성공극륭료migfilin-N단기인편단,표체병순화료GST-migfilin-N융합단백,제비료migfilin특이성항체.Western blotting검측migfilin재불동세포주중적표체,결과현시migfilin재폐암급대장암세포주중고표체.결론 migfilin특이성항체제비성공,위심입탐토migfilin재대장암중적작용전정료기출.
