动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2009年
11期
1-5
,共5页
刘颖%刘冬光%廖娟红%于清龙%熊家军%杨利国%陈焕春%郭爱珍
劉穎%劉鼕光%廖娟紅%于清龍%熊傢軍%楊利國%陳煥春%郭愛珍
류영%류동광%료연홍%우청룡%웅가군%양리국%진환춘%곽애진
梅花鹿%γ干扰素%抗病毒活性
梅花鹿%γ榦擾素%抗病毒活性
매화록%γ간우소%항병독활성
提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%.将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达.表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%.用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104 U/mL和4.61×104 U/mL.结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定.
提取經植物血凝素誘導培養的梅花鹿外週血淋巴細胞總RNA,應用RT-PCR方法擴增齣梅花鹿γ榦擾素成熟蛋白基因併將其剋隆到pMD18-T載體上,測序結果錶明,擴增片段為梅花鹿γ榦擾素成熟蛋白序列,與GenBank上髮錶的榦擾素序列同源性為100%.將其重組到原覈錶達載體pET32a(+)上,併在大腸埃希菌BL21中實現瞭高效錶達.錶達產物以His-Tag融閤蛋白的形式存在,錶達量約佔細菌總蛋白的32.6%.用鎳親和層析法對蛋白進行純化,併利用VSV-MDBK/IBRV細胞繫統分析其生物活性,重組梅花鹿γ榦擾素抗病毒活性分彆約為7.25×104 U/mL和4.61×104 U/mL.結果錶明,重組梅花鹿γ榦擾素特異性好,而且抗病毒活性比較穩定.
제취경식물혈응소유도배양적매화록외주혈림파세포총RNA,응용RT-PCR방법확증출매화록γ간우소성숙단백기인병장기극륭도pMD18-T재체상,측서결과표명,확증편단위매화록γ간우소성숙단백서렬,여GenBank상발표적간우소서렬동원성위100%.장기중조도원핵표체재체pET32a(+)상,병재대장애희균BL21중실현료고효표체.표체산물이His-Tag융합단백적형식존재,표체량약점세균총단백적32.6%.용얼친화층석법대단백진행순화,병이용VSV-MDBK/IBRV세포계통분석기생물활성,중조매화록γ간우소항병독활성분별약위7.25×104 U/mL화4.61×104 U/mL.결과표명,중조매화록γ간우소특이성호,이차항병독활성비교은정.
