CAJ | 학술논문

目的:初步探讨人胚胎神经干细胞(human fetal neural stem cells,hfNSCs)延迟移植对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及其机制.方法:体外分离、培养和鉴定hfNSCs,选取200～250g的Wistar大鼠28只建立T9～T11节段脊髓挫伤模型,损伤后第9天取20只BBB评分为4～5分的大鼠随机分为对照组及移植组(每组10只),同时在T10水平脊髓中线两侧1.5 mm处分别给予2μl不含hfNSCs的杜氏磷酸缓冲液(DPBS)及2μl含有105个体外培养第2代hfNSCs的DPBS,细胞移植后第7、14、28、42、56天用BBB评分评价两组后肢运动功能,移植后第28天及第56天用免疫组织化学法检测移植组大鼠损伤脊髓局部神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)和2′,3′-环腺苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)的表达情况,以评价大鼠损伤脊髓局部hfNSCs的存活及分化情况.移植后第56天髓磷脂碱性蛋白(MBP)染色及透射电子显微镜扫描观察移植组与对照组损伤局部髓鞘形成情况.结果:体外培养的hfNSCs表达Nestin,并可分化为星形胶质细胞[(61.2±1.6)％]、神经元[(27.6±3.4)％]及少突胶质细胞[(6.0±5.5)％].移植前及移植后第7、14天两组BBB评分比较无统计学差异(P＞0.05),移植组在移植后第28、42、56天评分(分别为8.30±1.07分,11.30±1.05分,15.10±1.12分)较对照组(分别为7.00±0.98分,8.30±1.02分,9.10±0.96分)明显提高(P＜0.05).在移植后第28天hfNSCs可分化为GFAP阳性的星形胶质细胞、MAP2阳性的神经元和CNPase阳性的少突胶质细胞,在移植后第56天hfNSCs仍在损伤局部存活并可分化为星形胶质细胞和少突胶质细胞,但未见神经元分化；移植后第56天星形胶质细胞的积分光密度(IOD)值(1502.31±131.92)大于移植后第28天(628.98±119.31)(P＜0.05),而少突胶质细胞在移植后第28天及第56天的变化无统计学差异.移植后第56天MBP染色证实人源性少突胶质细胞参与损伤区髓鞘的形成,透射电子显微镜扫描结果显示移植组有完整和连续的髓鞘形成,对照组髓鞘呈断裂及畸形表现.结论:hfNSCs延迟移植可促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,其机制可能与促进损伤局部髓鞘的形成有关. 目的:初步探討人胚胎神經榦細胞(human fetal neural stem cells,hfNSCs)延遲移植對脊髓損傷大鼠運動功能的影響及其機製.方法:體外分離、培養和鑒定hfNSCs,選取200～250g的Wistar大鼠28隻建立T9～T11節段脊髓挫傷模型,損傷後第9天取20隻BBB評分為4～5分的大鼠隨機分為對照組及移植組(每組10隻),同時在T10水平脊髓中線兩側1.5 mm處分彆給予2μl不含hfNSCs的杜氏燐痠緩遲液(DPBS)及2μl含有105箇體外培養第2代hfNSCs的DPBS,細胞移植後第7、14、28、42、56天用BBB評分評價兩組後肢運動功能,移植後第28天及第56天用免疫組織化學法檢測移植組大鼠損傷脊髓跼部神經膠質纖維痠性蛋白(GFAP)、微管相關蛋白2(MAP2)和2′,3′-環腺苷痠-3′-燐痠二酯酶(CNPase)的錶達情況,以評價大鼠損傷脊髓跼部hfNSCs的存活及分化情況.移植後第56天髓燐脂堿性蛋白(MBP)染色及透射電子顯微鏡掃描觀察移植組與對照組損傷跼部髓鞘形成情況.結果:體外培養的hfNSCs錶達Nestin,併可分化為星形膠質細胞[(61.2±1.6)％]、神經元[(27.6±3.4)％]及少突膠質細胞[(6.0±5.5)％].移植前及移植後第7、14天兩組BBB評分比較無統計學差異(P＞0.05),移植組在移植後第28、42、56天評分(分彆為8.30±1.07分,11.30±1.05分,15.10±1.12分)較對照組(分彆為7.00±0.98分,8.30±1.02分,9.10±0.96分)明顯提高(P＜0.05).在移植後第28天hfNSCs可分化為GFAP暘性的星形膠質細胞、MAP2暘性的神經元和CNPase暘性的少突膠質細胞,在移植後第56天hfNSCs仍在損傷跼部存活併可分化為星形膠質細胞和少突膠質細胞,但未見神經元分化；移植後第56天星形膠質細胞的積分光密度(IOD)值(1502.31±131.92)大于移植後第28天(628.98±119.31)(P＜0.05),而少突膠質細胞在移植後第28天及第56天的變化無統計學差異.移植後第56天MBP染色證實人源性少突膠質細胞參與損傷區髓鞘的形成,透射電子顯微鏡掃描結果顯示移植組有完整和連續的髓鞘形成,對照組髓鞘呈斷裂及畸形錶現.結論:hfNSCs延遲移植可促進脊髓損傷大鼠運動功能的恢複,其機製可能與促進損傷跼部髓鞘的形成有關.
목적:초보탐토인배태신경간세포(human fetal neural stem cells,hfNSCs)연지이식대척수손상대서운동공능적영향급기궤제.방법:체외분리、배양화감정hfNSCs,선취200～250g적Wistar대서28지건립T9～T11절단척수좌상모형,손상후제9천취20지BBB평분위4～5분적대서수궤분위대조조급이식조(매조10지),동시재T10수평척수중선량측1.5 mm처분별급여2μl불함hfNSCs적두씨린산완충액(DPBS)급2μl함유105개체외배양제2대hfNSCs적DPBS,세포이식후제7、14、28、42、56천용BBB평분평개량조후지운동공능,이식후제28천급제56천용면역조직화학법검측이식조대서손상척수국부신경효질섬유산성단백(GFAP)、미관상관단백2(MAP2)화2′,3′-배선감산-3′-린산이지매(CNPase)적표체정황,이평개대서손상척수국부hfNSCs적존활급분화정황.이식후제56천수린지감성단백(MBP)염색급투사전자현미경소묘관찰이식조여대조조손상국부수초형성정황.결과:체외배양적hfNSCs표체Nestin,병가분화위성형효질세포[(61.2±1.6)％]、신경원[(27.6±3.4)％]급소돌효질세포[(6.0±5.5)％].이식전급이식후제7、14천량조BBB평분비교무통계학차이(P＞0.05),이식조재이식후제28、42、56천평분(분별위8.30±1.07분,11.30±1.05분,15.10±1.12분)교대조조(분별위7.00±0.98분,8.30±1.02분,9.10±0.96분)명현제고(P＜0.05).재이식후제28천hfNSCs가분화위GFAP양성적성형효질세포、MAP2양성적신경원화CNPase양성적소돌효질세포,재이식후제56천hfNSCs잉재손상국부존활병가분화위성형효질세포화소돌효질세포,단미견신경원분화；이식후제56천성형효질세포적적분광밀도(IOD)치(1502.31±131.92)대우이식후제28천(628.98±119.31)(P＜0.05),이소돌효질세포재이식후제28천급제56천적변화무통계학차이.이식후제56천MBP염색증실인원성소돌효질세포삼여손상구수초적형성,투사전자현미경소묘결과현시이식조유완정화련속적수초형성,대조조수초정단렬급기형표현.결론:hfNSCs연지이식가촉진척수손상대서운동공능적회복,기궤제가능여촉진손상국부수초적형성유관.