中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
9期
68-76
,共9页
张传山%李峰%姚刚%郭毅%鲍柳君%陈学进
張傳山%李峰%姚剛%郭毅%鮑柳君%陳學進
장전산%리봉%요강%곽의%포류군%진학진
Red重组%次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因%基因敲除%载体
Red重組%次黃嘌呤-鳥嘌呤燐痠覈糖轉移酶基因%基因敲除%載體
Red중조%차황표령-조표령린산핵당전이매기인%기인고제%재체
利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因突变和基因打靶方面的研究还没有报道.实验首先在已经筛选到含有兔全长HPRT基因BAC克隆(LBNL1-304M19)的基础上,利用Red重组系统,通过Gap-Repair方式从此克隆上将一段47kb无启动子的HPRT基因组片段(不含有第1个外显子)克隆到pBACLinkSp质粒上,产生pBACLinkSp-rHPRT质粒.然后基于pBACLinkSp-rHPRT质粒,设计不同的同源臂,从而删除了HPRT基因的不同编码区,成功构建了三个不同的HPRT基因打靶载体.同时对利用同源重组技术敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究.基于实验所构建的三个不同的兔HPRT基因打靶载体,为探索兔成纤维细胞和胚胎干细胞基因打靶的适宜条件,及进一步获得兔HPRT基因敲除动物疾病模型奠定了基础.
利用EL350基因工程菌進行同源重組,成功進行基因敲除已有報道,但利用該繫統進行兔次黃嘌呤-鳥嘌呤燐痠覈糖轉移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因突變和基因打靶方麵的研究還沒有報道.實驗首先在已經篩選到含有兔全長HPRT基因BAC剋隆(LBNL1-304M19)的基礎上,利用Red重組繫統,通過Gap-Repair方式從此剋隆上將一段47kb無啟動子的HPRT基因組片段(不含有第1箇外顯子)剋隆到pBACLinkSp質粒上,產生pBACLinkSp-rHPRT質粒.然後基于pBACLinkSp-rHPRT質粒,設計不同的同源臂,從而刪除瞭HPRT基因的不同編碼區,成功構建瞭三箇不同的HPRT基因打靶載體.同時對利用同源重組技術敲除不同大小的DNA片段的效率進行瞭研究.基于實驗所構建的三箇不同的兔HPRT基因打靶載體,為探索兔成纖維細胞和胚胎榦細胞基因打靶的適宜條件,及進一步穫得兔HPRT基因敲除動物疾病模型奠定瞭基礎.
이용EL350기인공정균진행동원중조,성공진행기인고제이유보도,단이용해계통진행토차황표령-조표령린산핵당전이매(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)기인돌변화기인타파방면적연구환몰유보도.실험수선재이경사선도함유토전장HPRT기인BAC극륭(LBNL1-304M19)적기출상,이용Red중조계통,통과Gap-Repair방식종차극륭상장일단47kb무계동자적HPRT기인조편단(불함유제1개외현자)극륭도pBACLinkSp질립상,산생pBACLinkSp-rHPRT질립.연후기우pBACLinkSp-rHPRT질립,설계불동적동원비,종이산제료HPRT기인적불동편마구,성공구건료삼개불동적HPRT기인타파재체.동시대이용동원중조기술고제불동대소적DNA편단적효솔진행료연구.기우실험소구건적삼개불동적토HPRT기인타파재체,위탐색토성섬유세포화배태간세포기인타파적괄의조건,급진일보획득토HPRT기인고제동물질병모형전정료기출.
