CAJ | 학술논문

目的建立荧光定量-逆转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)测定TH细胞中IL-2 mRNA和IL-4 mRNA方法,并作临床初步应用.方法制备IL-2 cDNA和IL-4 cDNA,分别构建含有人IL-2基因和IL-4基因片段的pMD18-T质粒,克隆后作为定量阳性模板;设计和制备用于FQ-RT-PCR的引物和FAM、TAMRA标记的探针,优化实验条件,建立FQ-RT-PCR方法;用固相单抗方法从健康人、妇科良性疾患和恶性肿瘤患者以及慢性肾功能衰竭(CRF)患者PBMC中富集CD4(TH)细胞,经PMA和calcium ionophore诱导,提取总RNA,继用所建FQ-RT-PCR方法,作IL-2 mRNA和IL-4 mRNA定量测定.实验设β-actin为内控基因以监测RNA的质量.结果根据系列模板浓度的对数与CT值作直线回归建立标准曲线,线性范围为102～107copies/μl;不精密度试验显示,高值样品的批内、批间CV分别为7.8%和12.5%,低值样品的批内、批间CV分别为10.8%和19.5%;妇科恶性肿瘤患者与健康对照组和妇科良性疾患组比较,CRF患者与健康对照组比较,IL-2 mRNA表达均显著降低,IL-4 mRNA表达均显著升高(P＜0.001).结论用所建立的FQ-RT-PCR法可对TH细胞内IL-2 mRNA和IL-4 mRNA作定量测定,方法简便、敏感、准确;妇科恶性肿瘤患者和CRF患者TH细胞内IL-2 mRNA和IL-4 mRNA表达有明显的极化现象,呈TH2反应,提示恶性肿瘤患者和CRF患者TH细胞功能处于失衡状态.可通过改善和调整TH细胞的失衡提高恶性肿瘤患者的免疫监视功能和纠正CRF患者免疫紊乱.
목적건립형광정량-역전록-취합매련반응(FQ-RT-PCR)측정TH세포중IL-2 mRNA화IL-4 mRNA방법,병작림상초보응용.방법제비IL-2 cDNA화IL-4 cDNA,분별구건함유인IL-2기인화IL-4기인편단적pMD18-T질립,극륭후작위정량양성모판;설계화제비용우FQ-RT-PCR적인물화FAM、TAMRA표기적탐침,우화실험조건,건립FQ-RT-PCR방법;용고상단항방법종건강인、부과량성질환화악성종류환자이급만성신공능쇠갈(CRF)환자PBMC중부집CD4(TH)세포,경PMA화calcium ionophore유도,제취총RNA,계용소건FQ-RT-PCR방법,작IL-2 mRNA화IL-4 mRNA정량측정.실험설β-actin위내공기인이감측RNA적질량.결과근거계렬모판농도적대수여CT치작직선회귀건립표준곡선,선성범위위102～107copies/μl;불정밀도시험현시,고치양품적비내、비간CV분별위7.8%화12.5%,저치양품적비내、비간CV분별위10.8%화19.5%;부과악성종류환자여건강대조조화부과량성질환조비교,CRF환자여건강대조조비교,IL-2 mRNA표체균현저강저,IL-4 mRNA표체균현저승고(P＜0.001).결론용소건립적FQ-RT-PCR법가대TH세포내IL-2 mRNA화IL-4 mRNA작정량측정,방법간편、민감、준학;부과악성종류환자화CRF환자TH세포내IL-2 mRNA화IL-4 mRNA표체유명현적겁화현상,정TH2반응,제시악성종류환자화CRF환자TH세포공능처우실형상태.가통과개선화조정TH세포적실형제고악성종류환자적면역감시공능화규정CRF환자면역문란.