重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2012年
9期
884-887
,共4页
李嘉杰%闻海兵%邹树峰%严剑%洪涛
李嘉傑%聞海兵%鄒樹峰%嚴劍%洪濤
리가걸%문해병%추수봉%엄검%홍도
神经胶质瘤%转染%质粒%连接蛋白43%逆转录聚合酶链反应
神經膠質瘤%轉染%質粒%連接蛋白43%逆轉錄聚閤酶鏈反應
신경효질류%전염%질립%련접단백43%역전록취합매련반응
目的 建立稳定过表达pcDNA3.1/连接蛋白43(Cx43)重组质粒的人神经胶质瘤U251细胞系.方法 设计人Cx43的引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从低表达 Cx43的U251细胞中扩增出目的 片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒,经酶切、PCR、测序检测构建的正确性.采用脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,G418筛选出稳定转染的细胞系,采用RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染pcDNA3.1/Cx43重组质粒的U251细胞中Cx43基因、蛋白的表达水平.结果 酶切、PCR及测序表明pcDNA3.1/Cx43重组质粒构建成功,筛选获得稳定过表达Cx43的U251细胞.结论 构建了pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒及稳定过表达Cx43的U251细胞株,为下一步以Cx43为靶标进行人神经胶质瘤的基因治疗研究奠定了实验基础.
目的 建立穩定過錶達pcDNA3.1/連接蛋白43(Cx43)重組質粒的人神經膠質瘤U251細胞繫.方法 設計人Cx43的引物,採用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)從低錶達 Cx43的U251細胞中擴增齣目的 片段,雙酶切後定嚮連入pcDNA3.1載體,構建pcDNA3.1/Cx43真覈錶達質粒,經酶切、PCR、測序檢測構建的正確性.採用脂質體轉染法將重組質粒轉入U251細胞,G418篩選齣穩定轉染的細胞繫,採用RT-PCR、Western blot分彆檢測穩定轉染pcDNA3.1/Cx43重組質粒的U251細胞中Cx43基因、蛋白的錶達水平.結果 酶切、PCR及測序錶明pcDNA3.1/Cx43重組質粒構建成功,篩選穫得穩定過錶達Cx43的U251細胞.結論 構建瞭pcDNA3.1/Cx43真覈錶達質粒及穩定過錶達Cx43的U251細胞株,為下一步以Cx43為靶標進行人神經膠質瘤的基因治療研究奠定瞭實驗基礎.
목적 건립은정과표체pcDNA3.1/련접단백43(Cx43)중조질립적인신경효질류U251세포계.방법 설계인Cx43적인물,채용역전록취합매련반응(RT-PCR)종저표체 Cx43적U251세포중확증출목적 편단,쌍매절후정향련입pcDNA3.1재체,구건pcDNA3.1/Cx43진핵표체질립,경매절、PCR、측서검측구건적정학성.채용지질체전염법장중조질립전입U251세포,G418사선출은정전염적세포계,채용RT-PCR、Western blot분별검측은정전염pcDNA3.1/Cx43중조질립적U251세포중Cx43기인、단백적표체수평.결과 매절、PCR급측서표명pcDNA3.1/Cx43중조질립구건성공,사선획득은정과표체Cx43적U251세포.결론 구건료pcDNA3.1/Cx43진핵표체질립급은정과표체Cx43적U251세포주,위하일보이Cx43위파표진행인신경효질류적기인치료연구전정료실험기출.
