农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
2期
356-362
,共7页
龙亚芹%王万东%左瑞娟%李凡%尹朝先%陈海如
龍亞芹%王萬東%左瑞娟%李凡%尹朝先%陳海如
룡아근%왕만동%좌서연%리범%윤조선%진해여
烟草丛顶病毒(TBTV)%ORF3和ORF4%原核表达%抗血清制备
煙草叢頂病毒(TBTV)%ORF3和ORF4%原覈錶達%抗血清製備
연초총정병독(TBTV)%ORF3화ORF4%원핵표체%항혈청제비
为制备烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4多克隆抗体,采用RT-PCR方法克隆了TBTV保山龙陵分离物(TBTV-BSLLi)的ORF3和ORF4,亚克隆至pMD18-T载体中,经测序正确后,将该基因插入原核表达载体pET28a(+)中,通过热击转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(plysS),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化,成功地克隆了TBTV的ORF3和ORF4,建立了其原核表达和表达产物的纯化体系,获得了高纯度的ORF3、ORF4蛋白.用纯化的蛋白免疫大白兔,获得高效价的特异性抗血清.DAS-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间烟草(Nicotiana tabacumL.)样品及传播介体的检测.本研究为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件.
為製備煙草叢頂病毒(TBTV)ORF3和ORF4多剋隆抗體,採用RT-PCR方法剋隆瞭TBTV保山龍陵分離物(TBTV-BSLLi)的ORF3和ORF4,亞剋隆至pMD18-T載體中,經測序正確後,將該基因插入原覈錶達載體pET28a(+)中,通過熱擊轉化大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(plysS),以IPTG誘導6×His融閤蛋白的錶達,併經Ni2+親和柱層析純化,成功地剋隆瞭TBTV的ORF3和ORF4,建立瞭其原覈錶達和錶達產物的純化體繫,穫得瞭高純度的ORF3、ORF4蛋白.用純化的蛋白免疫大白兔,穫得高效價的特異性抗血清.DAS-ELISA檢測結果錶明,製備的抗血清可用于田間煙草(Nicotiana tabacumL.)樣品及傳播介體的檢測.本研究為用血清學方法檢測該病毒提供瞭基礎條件.
위제비연초총정병독(TBTV)ORF3화ORF4다극륭항체,채용RT-PCR방법극륭료TBTV보산룡릉분리물(TBTV-BSLLi)적ORF3화ORF4,아극륭지pMD18-T재체중,경측서정학후,장해기인삽입원핵표체재체pET28a(+)중,통과열격전화대장간균(Escherichia coli)BL21(plysS),이IPTG유도6×His융합단백적표체,병경Ni2+친화주층석순화,성공지극륭료TBTV적ORF3화ORF4,건립료기원핵표체화표체산물적순화체계,획득료고순도적ORF3、ORF4단백.용순화적단백면역대백토,획득고효개적특이성항혈청.DAS-ELISA검측결과표명,제비적항혈청가용우전간연초(Nicotiana tabacumL.)양품급전파개체적검측.본연구위용혈청학방법검측해병독제공료기출조건.
