生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2010年
9期
169-172
,共4页
刘艳玲%张贺吉%吴江锋%柳长柏
劉豔玲%張賀吉%吳江鋒%柳長柏
류염령%장하길%오강봉%류장백
Gremlin1%肝纤维化%真核表达
Gremlin1%肝纖維化%真覈錶達
Gremlin1%간섬유화%진핵표체
构建大鼠gremlin1的真核表达载体pcDNA-gremlin,并观察其在真核细胞中的表达.从大鼠脑组织中提取mRNA通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及巢式聚合酶链反应(nest-PCR)获得编码gremlin1的cDNA,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染HSC-T6细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内gremlin1的表达.结果显示,构建了大鼠gremlin1的真核表达载体,转染HSC-T6细胞培养48 h后,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染HSC-T6细胞内gremlin1的表达显著增高.成功构建了真核表达载体pcDNA-gremlin,为研究gremlin在大鼠肝纤维化发生发展过程中的作用及作用机制奠定了基础.
構建大鼠gremlin1的真覈錶達載體pcDNA-gremlin,併觀察其在真覈細胞中的錶達.從大鼠腦組織中提取mRNA通過逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)及巢式聚閤酶鏈反應(nest-PCR)穫得編碼gremlin1的cDNA,定嚮剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1(+)中;經酶切和測序鑒定構建正確,應用脂質體法轉染HSC-T6細胞,併通過蛋白免疫印跡法檢測細胞內gremlin1的錶達.結果顯示,構建瞭大鼠gremlin1的真覈錶達載體,轉染HSC-T6細胞培養48 h後,收集併裂解轉染細胞,蛋白免疫印跡法檢測到轉染HSC-T6細胞內gremlin1的錶達顯著增高.成功構建瞭真覈錶達載體pcDNA-gremlin,為研究gremlin在大鼠肝纖維化髮生髮展過程中的作用及作用機製奠定瞭基礎.
구건대서gremlin1적진핵표체재체pcDNA-gremlin,병관찰기재진핵세포중적표체.종대서뇌조직중제취mRNA통과역전록취합매련반응(RT-PCR)급소식취합매련반응(nest-PCR)획득편마gremlin1적cDNA,정향극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(+)중;경매절화측서감정구건정학,응용지질체법전염HSC-T6세포,병통과단백면역인적법검측세포내gremlin1적표체.결과현시,구건료대서gremlin1적진핵표체재체,전염HSC-T6세포배양48 h후,수집병렬해전염세포,단백면역인적법검측도전염HSC-T6세포내gremlin1적표체현저증고.성공구건료진핵표체재체pcDNA-gremlin,위연구gremlin재대서간섬유화발생발전과정중적작용급작용궤제전정료기출.
