山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
26期
26-28
,共3页
周锦勇%潘金顺%张乐%刘勇%顾香芳%陈军浩
週錦勇%潘金順%張樂%劉勇%顧香芳%陳軍浩
주금용%반금순%장악%류용%고향방%진군호
基因克隆%逆转录聚合酶链反应%人类宫颈癌癌基因%肝肿瘤,肝癌
基因剋隆%逆轉錄聚閤酶鏈反應%人類宮頸癌癌基因%肝腫瘤,肝癌
기인극륭%역전록취합매련반응%인류궁경암암기인%간종류,간암
目的 为人宫颈癌基因(HCCR)在肝癌发生、发展中的生物学效应及机制研究提供理想工具.方法 培养人HepG2细胞,RT-PCR扩增出HCCR基因片段,将其连接到pCR T7 TOPO TA/NT克隆载体中,命名为pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR.运用交叉引物PCR筛选正确连接的克隆.再用EcoR I和BamH I限制性内切酶酶切鉴定和测序验证.将其转化BL21细菌,用IPTG诱导其表达相应的蛋白质,并用Western blotting验证.结果 pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR原核表达载体构建成功.酶切鉴定和测序均与预期一致.用IPTG诱导转化此质粒后的BL21细菌,得到相应大小的蛋白质.结论 pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR 原核表达载体构建成功;其可作为HCCR基因功能研究及其与肝癌相关性研究的理想工具.
目的 為人宮頸癌基因(HCCR)在肝癌髮生、髮展中的生物學效應及機製研究提供理想工具.方法 培養人HepG2細胞,RT-PCR擴增齣HCCR基因片段,將其連接到pCR T7 TOPO TA/NT剋隆載體中,命名為pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR.運用交扠引物PCR篩選正確連接的剋隆.再用EcoR I和BamH I限製性內切酶酶切鑒定和測序驗證.將其轉化BL21細菌,用IPTG誘導其錶達相應的蛋白質,併用Western blotting驗證.結果 pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR原覈錶達載體構建成功.酶切鑒定和測序均與預期一緻.用IPTG誘導轉化此質粒後的BL21細菌,得到相應大小的蛋白質.結論 pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR 原覈錶達載體構建成功;其可作為HCCR基因功能研究及其與肝癌相關性研究的理想工具.
목적 위인궁경암기인(HCCR)재간암발생、발전중적생물학효응급궤제연구제공이상공구.방법 배양인HepG2세포,RT-PCR확증출HCCR기인편단,장기련접도pCR T7 TOPO TA/NT극륭재체중,명명위pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR.운용교차인물PCR사선정학련접적극륭.재용EcoR I화BamH I한제성내절매매절감정화측서험증.장기전화BL21세균,용IPTG유도기표체상응적단백질,병용Western blotting험증.결과 pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR원핵표체재체구건성공.매절감정화측서균여예기일치.용IPTG유도전화차질립후적BL21세균,득도상응대소적단백질.결론 pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR 원핵표체재체구건성공;기가작위HCCR기인공능연구급기여간암상관성연구적이상공구.
