南京大学学报(自然科学版)
南京大學學報(自然科學版)
남경대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY
2001年
5期
551-556
,共6页
原核表达%c-Myc%凝胶阻滞分析(EMSA)
原覈錶達%c-Myc%凝膠阻滯分析(EMSA)
원핵표체%c-Myc%응효조체분석(EMSA)
将编码人C-myc羧基端bHLH/Z结构域的92个氨基酸的cDNA片段(c-myc-c92)对框插入pGEX-2T原核表达载体中,使之与谷胱甘肽转移酶(GST)编码基因融合,并将重组质粒导人大肠杆菌BL21(DE3)中,由IPTG诱导融合基因高效表达,并用Glutatjopme Sepharose 4B亲和柱纯化融合蛋白GST-c-Myc-92,凝胶阻滞(EMSA)分析显示该纯化蛋白能与CACGTG序列特异结合,并且只有高浓度的GST-c-Myc-c92才能与探针结合.结果表明在体外情况下高浓度c-Myc羧基端能自身二聚体化,此发现丰富了Myc-Max-Mad的调控网络,并为进一步研究c-myc的功能和调控提供了一定的线索.
將編碼人C-myc羧基耑bHLH/Z結構域的92箇氨基痠的cDNA片段(c-myc-c92)對框插入pGEX-2T原覈錶達載體中,使之與穀胱甘肽轉移酶(GST)編碼基因融閤,併將重組質粒導人大腸桿菌BL21(DE3)中,由IPTG誘導融閤基因高效錶達,併用Glutatjopme Sepharose 4B親和柱純化融閤蛋白GST-c-Myc-92,凝膠阻滯(EMSA)分析顯示該純化蛋白能與CACGTG序列特異結閤,併且隻有高濃度的GST-c-Myc-c92纔能與探針結閤.結果錶明在體外情況下高濃度c-Myc羧基耑能自身二聚體化,此髮現豐富瞭Myc-Max-Mad的調控網絡,併為進一步研究c-myc的功能和調控提供瞭一定的線索.
장편마인C-myc최기단bHLH/Z결구역적92개안기산적cDNA편단(c-myc-c92)대광삽입pGEX-2T원핵표체재체중,사지여곡광감태전이매(GST)편마기인융합,병장중조질립도인대장간균BL21(DE3)중,유IPTG유도융합기인고효표체,병용Glutatjopme Sepharose 4B친화주순화융합단백GST-c-Myc-92,응효조체(EMSA)분석현시해순화단백능여CACGTG서렬특이결합,병차지유고농도적GST-c-Myc-c92재능여탐침결합.결과표명재체외정황하고농도c-Myc최기단능자신이취체화,차발현봉부료Myc-Max-Mad적조공망락,병위진일보연구c-myc적공능화조공제공료일정적선색.
