CAJ | 학술논문

[目的]细菌基因组大片段尤其是基因簇的克隆与操作,是细菌基因功能分析的一个难点.基因组测序工作的不断完成和序列信息的大量积累,为细菌基因组:DNA的操作提供了方便.本文报道了利用细菌的全基因组信息和质粒拯救法的原理建立的一种克隆细菌基因组大片段的方法.[方法]首先,根据基因组序列信息,在待克隆片段的一侧扩增一段DNA,并将其克隆到自杀载体上构建打靶质粒,然后,将打靶质粒整合到细菌的基因组中构建重组菌,提取重组菌的基因组DNA,酶切,自连,转化,将自杀质粒与待克隆的目的片段一起拯救出来.最后,根据需要将拯救的DNA片段亚克隆到新的载体中.[结果]我们利用该方法克隆了布鲁氏菌中长度为11kb的virB操纵子,并构建了互补质粒.将该质粒导入到virB的突变株中后使virB操纵子的转录活性得到了恢复,表明该策略切实可行.[结论]这种重组克隆策略给我们提供了一种新的对细菌基因组大片段进行操作的方法.
[목적]세균기인조대편단우기시기인족적극륭여조작,시세균기인공능분석적일개난점.기인조측서공작적불단완성화서렬신식적대량적루,위세균기인조:DNA적조작제공료방편.본문보도료이용세균적전기인조신식화질립증구법적원리건립적일충극륭세균기인조대편단적방법.[방법]수선,근거기인조서렬신식,재대극륭편단적일측확증일단DNA,병장기극륭도자살재체상구건타파질립,연후,장타파질립정합도세균적기인조중구건중조균,제취중조균적기인조DNA,매절,자련,전화,장자살질립여대극륭적목적편단일기증구출래.최후,근거수요장증구적DNA편단아극륭도신적재체중.[결과]아문이용해방법극륭료포로씨균중장도위11kb적virB조종자,병구건료호보질립.장해질립도입도virB적돌변주중후사virB조종자적전록활성득도료회복,표명해책략절실가행.[결론]저충중조극륭책략급아문제공료일충신적대세균기인조대편단진행조작적방법.