中国现代医学杂志
中國現代醫學雜誌
중국현대의학잡지
CHINA JOURNAL OF MODERN MEDICINE
2008年
1期
76-79,83
,共5页
李少华%文会龙%顾昕%汪洋%吕立夏%李艳娜%那曼丽%崔银江
李少華%文會龍%顧昕%汪洋%呂立夏%李豔娜%那曼麗%崔銀江
리소화%문회룡%고흔%왕양%려립하%리염나%나만려%최은강
神经干细胞%脑源性神经营养因子%增强绿色荧光蛋白%腺病毒载体%免疫组织化学
神經榦細胞%腦源性神經營養因子%增彊綠色熒光蛋白%腺病毒載體%免疫組織化學
신경간세포%뇌원성신경영양인자%증강록색형광단백%선병독재체%면역조직화학
目的 研究腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP的构建及其在神经干细胞(NSCs)中的表达.方法 通过RT-PCR从大鼠海马中获得BDNF基因,通过基因克隆、HEK293包装,获得含增强绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体pAd-BDNF-EGFP,将其感染原代培养的神经干细胞,观察EGFP及BDNF 2种基因的表达,镜下测定转染率,并检测RT-PCR产物,证实BDNF的存在.转染后的神经干细胞经G418筛选,抗性细胞传代扩增后获得成功转染BDNF基因的NSCs克隆.结果 荧光显微镜下可见感染后的NSCs表达EGFP而发出绿色荧光;通过RT-PCR证明感染后的NSCs具有表达BDNF的能力;用ELISA鉴定细胞上清中分泌的BDNF,72 h的含量达到最高值,为12.78 ng/mL;证明通过构建病毒的感染可以使神经干细胞获得分泌BDNF的能力,且EGFP基因可作为神经干细胞移植研究中良好的示踪剂.结论 腺病毒病毒介导EGFP基因及BDNF基因在大鼠胚胎神经干细胞中成功表达,为应用以神经干细胞直接作为基因靶细胞,介导基因治疗中枢神经系统疾病奠定了基础.
目的 研究腺病毒載體Ad-BDNF-EGFP的構建及其在神經榦細胞(NSCs)中的錶達.方法 通過RT-PCR從大鼠海馬中穫得BDNF基因,通過基因剋隆、HEK293包裝,穫得含增彊綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒錶達載體pAd-BDNF-EGFP,將其感染原代培養的神經榦細胞,觀察EGFP及BDNF 2種基因的錶達,鏡下測定轉染率,併檢測RT-PCR產物,證實BDNF的存在.轉染後的神經榦細胞經G418篩選,抗性細胞傳代擴增後穫得成功轉染BDNF基因的NSCs剋隆.結果 熒光顯微鏡下可見感染後的NSCs錶達EGFP而髮齣綠色熒光;通過RT-PCR證明感染後的NSCs具有錶達BDNF的能力;用ELISA鑒定細胞上清中分泌的BDNF,72 h的含量達到最高值,為12.78 ng/mL;證明通過構建病毒的感染可以使神經榦細胞穫得分泌BDNF的能力,且EGFP基因可作為神經榦細胞移植研究中良好的示蹤劑.結論 腺病毒病毒介導EGFP基因及BDNF基因在大鼠胚胎神經榦細胞中成功錶達,為應用以神經榦細胞直接作為基因靶細胞,介導基因治療中樞神經繫統疾病奠定瞭基礎.
목적 연구선병독재체Ad-BDNF-EGFP적구건급기재신경간세포(NSCs)중적표체.방법 통과RT-PCR종대서해마중획득BDNF기인,통과기인극륭、HEK293포장,획득함증강록색형광단백기인적중조선병독표체재체pAd-BDNF-EGFP,장기감염원대배양적신경간세포,관찰EGFP급BDNF 2충기인적표체,경하측정전염솔,병검측RT-PCR산물,증실BDNF적존재.전염후적신경간세포경G418사선,항성세포전대확증후획득성공전염BDNF기인적NSCs극륭.결과 형광현미경하가견감염후적NSCs표체EGFP이발출록색형광;통과RT-PCR증명감염후적NSCs구유표체BDNF적능력;용ELISA감정세포상청중분비적BDNF,72 h적함량체도최고치,위12.78 ng/mL;증명통과구건병독적감염가이사신경간세포획득분비BDNF적능력,차EGFP기인가작위신경간세포이식연구중량호적시종제.결론 선병독병독개도EGFP기인급BDNF기인재대서배태신경간세포중성공표체,위응용이신경간세포직접작위기인파세포,개도기인치료중추신경계통질병전정료기출.
