复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2008年
1期
116-119
,共4页
冯美卿%史训龙%黄海%张金晨%周珮
馮美卿%史訓龍%黃海%張金晨%週珮
풍미경%사훈룡%황해%장금신%주패
DAAO%重组菌表型%构建策略%表达%发酵调节
DAAO%重組菌錶型%構建策略%錶達%髮酵調節
DAAO%중조균표형%구건책략%표체%발효조절
目的 构建不含编码β-内酰胺酶编码基因的D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase,DAAO)工程菌,对不同构建策略构建的重组菌进行发酵调节研究.方法 采用分子生物学手段,利用不同的策略、不同的毕赤酵母宿主菌,构建DAAO工程菌;利用微生物发酵和调节手段,对工程菌的发酵条件进行优化.结果 获得了表型不同的3株重组菌(Muts的PDK13和PDGA10,Mut+的PDG27),它们的最佳生长条件基本相似,诱导表达条件却不相同,在Basal salts培养基内,当生长时间为36 h,诱导培养基起始pH为6.0、甲醇浓度为0.5%时,最有利于DAAO表达.在菌体密度相同的条件下,Mut+表型(PDG27)甲醇代谢快,诱导24 h,DAAO活力达到最高;Muts型(PDK13和PDGA10)甲醇代谢慢,诱导36 h,DAAO活力达最高;通气量一定时,菌体密度增加,DAAO表达量增加,菌体增加到一定程度表达量反而下降,表明通气量应随菌体密度的增大而增加.结论 Muts型重组菌对通气量要求低且更有利于高密度发酵.
目的 構建不含編碼β-內酰胺酶編碼基因的D-氨基痠氧化酶(D-amino acid oxidase,DAAO)工程菌,對不同構建策略構建的重組菌進行髮酵調節研究.方法 採用分子生物學手段,利用不同的策略、不同的畢赤酵母宿主菌,構建DAAO工程菌;利用微生物髮酵和調節手段,對工程菌的髮酵條件進行優化.結果 穫得瞭錶型不同的3株重組菌(Muts的PDK13和PDGA10,Mut+的PDG27),它們的最佳生長條件基本相似,誘導錶達條件卻不相同,在Basal salts培養基內,噹生長時間為36 h,誘導培養基起始pH為6.0、甲醇濃度為0.5%時,最有利于DAAO錶達.在菌體密度相同的條件下,Mut+錶型(PDG27)甲醇代謝快,誘導24 h,DAAO活力達到最高;Muts型(PDK13和PDGA10)甲醇代謝慢,誘導36 h,DAAO活力達最高;通氣量一定時,菌體密度增加,DAAO錶達量增加,菌體增加到一定程度錶達量反而下降,錶明通氣量應隨菌體密度的增大而增加.結論 Muts型重組菌對通氣量要求低且更有利于高密度髮酵.
목적 구건불함편마β-내선알매편마기인적D-안기산양화매(D-amino acid oxidase,DAAO)공정균,대불동구건책략구건적중조균진행발효조절연구.방법 채용분자생물학수단,이용불동적책략、불동적필적효모숙주균,구건DAAO공정균;이용미생물발효화조절수단,대공정균적발효조건진행우화.결과 획득료표형불동적3주중조균(Muts적PDK13화PDGA10,Mut+적PDG27),타문적최가생장조건기본상사,유도표체조건각불상동,재Basal salts배양기내,당생장시간위36 h,유도배양기기시pH위6.0、갑순농도위0.5%시,최유리우DAAO표체.재균체밀도상동적조건하,Mut+표형(PDG27)갑순대사쾌,유도24 h,DAAO활력체도최고;Muts형(PDK13화PDGA10)갑순대사만,유도36 h,DAAO활력체최고;통기량일정시,균체밀도증가,DAAO표체량증가,균체증가도일정정도표체량반이하강,표명통기량응수균체밀도적증대이증가.결론 Muts형중조균대통기량요구저차경유리우고밀도발효.
