CAJ | 학술논문

目的:由于技术原理的限制,目前尚不能对所有的HLA等位基因进行严格的区分,特别是以往没有发现的新基因序列只能通过测序的方法解决,然而,当遇到等位基因杂合时,测序给出的结果仍然无法确认新的序列改变发生在等位基因的哪一侧,这时需要用分子生物学方法分离杂合子然后进行测序才能确定新的基因序列.采用基因克隆方法确认HLA新等位基因.方法:实验于2006-01/05在河南省红十字血液中心HLA实验室,美国海军骨髓库HLA实验室完成.造血干细胞血样由中华骨髓库提供.采用荧光微珠HLA分型方法对中华骨髓库捐献者血样进行HLA分型检测,无法给出确切结果的摸棱两可结果标本用基因克隆(TOPO TA Cloning)、DNA测序的方法确认新的HLA基因序列.结果:通过克隆分离杂合等位基因,再进行测序确认发现新的序列与B*3709相比,出现4个核苷酸改变:1.355nt C＞A,2.363nt C＞G,3.412ntG＞A,4.477nt C＞G,而且均发生在HLA-B基因外显子3(exon 3).4处改变引起氨基酸编码改变:①编码95 CTC＞ATC,氨基酸改变L＞I(亮氨酸＞异亮氨酸).②97 AGC＞AGG,S＞R(丝氨酸＞精氨酸).③114 GAC＞AAC D＞N(天门冬氨酸＞天冬酰胺).④135 GCC＞GCG A=A无氨基酸改变.结论:①新的基因序列已经在GenBnak注册,被WHO的HLA因子命名委员会得到正式命名为HLA-B*3712基因.②基因克隆是确认HLA新基因的根本方法.
목적:유우기술원리적한제,목전상불능대소유적HLA등위기인진행엄격적구분,특별시이왕몰유발현적신기인서렬지능통과측서적방법해결,연이,당우도등위기인잡합시,측서급출적결과잉연무법학인신적서렬개변발생재등위기인적나일측,저시수요용분자생물학방법분리잡합자연후진행측서재능학정신적기인서렬.채용기인극륭방법학인HLA신등위기인.방법:실험우2006-01/05재하남성홍십자혈액중심HLA실험실,미국해군골수고HLA실험실완성.조혈간세포혈양유중화골수고제공.채용형광미주HLA분형방법대중화골수고연헌자혈양진행HLA분형검측,무법급출학절결과적모릉량가결과표본용기인극륭(TOPO TA Cloning)、DNA측서적방법학인신적HLA기인서렬.결과:통과극륭분리잡합등위기인,재진행측서학인발현신적서렬여B*3709상비,출현4개핵감산개변:1.355nt C＞A,2.363nt C＞G,3.412ntG＞A,4.477nt C＞G,이차균발생재HLA-B기인외현자3(exon 3).4처개변인기안기산편마개변:①편마95 CTC＞ATC,안기산개변L＞I(량안산＞이량안산).②97 AGC＞AGG,S＞R(사안산＞정안산).③114 GAC＞AAC D＞N(천문동안산＞천동선알).④135 GCC＞GCG A=A무안기산개변.결론:①신적기인서렬이경재GenBnak주책,피WHO적HLA인자명명위원회득도정식명명위HLA-B*3712기인.②기인극륭시학인HLA신기인적근본방법.