华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2007年
6期
24-29
,共6页
徐粤宇%周玉雷%赵茂林%王志平%王克武%张艳
徐粵宇%週玉雷%趙茂林%王誌平%王剋武%張豔
서월우%주옥뢰%조무림%왕지평%왕극무%장염
多枝赖草%Mb级DNA%基因组文库%脉冲交变电场电泳%酶切
多枝賴草%Mb級DNA%基因組文庫%脈遲交變電場電泳%酶切
다지뢰초%Mb급DNA%기인조문고%맥충교변전장전영%매절
Mb级DNA的制备和酶切是构建YAC,PAC,BAC,BIBAC和TAC文库与大尺度物理图谱的基础.以浓度0.4%(m/m)NaCl人工模拟盐池中生长的多枝赖草再生叶为材料提取细胞核,经钢丝细胞筛过滤,多次回收滤渣和离心上清中的细胞核,相差显微镜调浓度达108个/mL后,经LMP包埋,蛋白酶K降解核蛋白,脉冲电泳纯化回收后,在LMP胶块中2 Mb以上DNA的浓度约为250 ng/μL.在胶中经Hind III部分酶切再用脉冲电泳回收不同大小范围的DNA,电洗脱浓缩除盐后浓度约为25 ng/μL.用此方法得到的核DNA不但无细胞器DNA等的污染,而且浓度高,可直接用于各种人工染色体文库的构建.
Mb級DNA的製備和酶切是構建YAC,PAC,BAC,BIBAC和TAC文庫與大呎度物理圖譜的基礎.以濃度0.4%(m/m)NaCl人工模擬鹽池中生長的多枝賴草再生葉為材料提取細胞覈,經鋼絲細胞篩過濾,多次迴收濾渣和離心上清中的細胞覈,相差顯微鏡調濃度達108箇/mL後,經LMP包埋,蛋白酶K降解覈蛋白,脈遲電泳純化迴收後,在LMP膠塊中2 Mb以上DNA的濃度約為250 ng/μL.在膠中經Hind III部分酶切再用脈遲電泳迴收不同大小範圍的DNA,電洗脫濃縮除鹽後濃度約為25 ng/μL.用此方法得到的覈DNA不但無細胞器DNA等的汙染,而且濃度高,可直接用于各種人工染色體文庫的構建.
Mb급DNA적제비화매절시구건YAC,PAC,BAC,BIBAC화TAC문고여대척도물리도보적기출.이농도0.4%(m/m)NaCl인공모의염지중생장적다지뢰초재생협위재료제취세포핵,경강사세포사과려,다차회수려사화리심상청중적세포핵,상차현미경조농도체108개/mL후,경LMP포매,단백매K강해핵단백,맥충전영순화회수후,재LMP효괴중2 Mb이상DNA적농도약위250 ng/μL.재효중경Hind III부분매절재용맥충전영회수불동대소범위적DNA,전세탈농축제염후농도약위25 ng/μL.용차방법득도적핵DNA불단무세포기DNA등적오염,이차농도고,가직접용우각충인공염색체문고적구건.
