中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2008年
1期
47-54
,共8页
王海英%叶星%白俊杰%夏仕玲%劳海华%简清%王琳
王海英%葉星%白俊傑%夏仕玲%勞海華%簡清%王琳
왕해영%협성%백준걸%하사령%로해화%간청%왕림
唐鱼%β-肌动蛋白启动子%红色荧光蛋白%转基因%显微注射%表达
唐魚%β-肌動蛋白啟動子%紅色熒光蛋白%轉基因%顯微註射%錶達
당어%β-기동단백계동자%홍색형광단백%전기인%현미주사%표체
利用PCR技术克隆唐鱼(Tanichthys albonubes)β-actin基因.所克隆的β-actin基因片段为1 464 bp,包含长为1 374 bp的启动调控区和90 bp的部分开放阅读框.启动调控区包括105 bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子.上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAAT Box、TATA Box、CArG Box等元件.将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上,并显微注射到唐鱼受精卵中,荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)的表达.结果表明,RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高,最高可达51.8%,且RFP的表达水平较高.PCR检测转基因唐鱼的部分器官组织,在被检组织器官中均能检测到外源RFP基因;而RT-PCR以及Southern blot验证显示RFPmRNA的表达有所不同;Southern blot检测肌肉组织基因组DNA,可见比阳性载体大的杂交条带.说明所检测的组织中已发生外源基因RFP的整合,但有些组织存在表达水平较低或者不表达的现象.本实验分离到的β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能,可启动外源基因在唐鱼体内的高效表达,从而为下一步进行功能基因的转化研究奠定基础.
利用PCR技術剋隆唐魚(Tanichthys albonubes)β-actin基因.所剋隆的β-actin基因片段為1 464 bp,包含長為1 374 bp的啟動調控區和90 bp的部分開放閱讀框.啟動調控區包括105 bp的β-actin基因上遊調控序列、第一箇外顯子和第一箇內含子.上遊調控序列中含有對轉錄起重要作用的CAAT Box、TATA Box、CArG Box等元件.將唐魚β-actin啟動調控區剋隆到紅色熒光錶達載體pDsRed2-1上,併顯微註射到唐魚受精卵中,熒光顯微鏡觀察紅色熒光蛋白(RFP)的錶達.結果錶明,RFP在轉基因唐魚中的錶達暘性率較高,最高可達51.8%,且RFP的錶達水平較高.PCR檢測轉基因唐魚的部分器官組織,在被檢組織器官中均能檢測到外源RFP基因;而RT-PCR以及Southern blot驗證顯示RFPmRNA的錶達有所不同;Southern blot檢測肌肉組織基因組DNA,可見比暘性載體大的雜交條帶.說明所檢測的組織中已髮生外源基因RFP的整閤,但有些組織存在錶達水平較低或者不錶達的現象.本實驗分離到的β-actin基因啟動子序列具有有效的驅動功能,可啟動外源基因在唐魚體內的高效錶達,從而為下一步進行功能基因的轉化研究奠定基礎.
이용PCR기술극륭당어(Tanichthys albonubes)β-actin기인.소극륭적β-actin기인편단위1 464 bp,포함장위1 374 bp적계동조공구화90 bp적부분개방열독광.계동조공구포괄105 bp적β-actin기인상유조공서렬、제일개외현자화제일개내함자.상유조공서렬중함유대전록기중요작용적CAAT Box、TATA Box、CArG Box등원건.장당어β-actin계동조공구극륭도홍색형광표체재체pDsRed2-1상,병현미주사도당어수정란중,형광현미경관찰홍색형광단백(RFP)적표체.결과표명,RFP재전기인당어중적표체양성솔교고,최고가체51.8%,차RFP적표체수평교고.PCR검측전기인당어적부분기관조직,재피검조직기관중균능검측도외원RFP기인;이RT-PCR이급Southern blot험증현시RFPmRNA적표체유소불동;Southern blot검측기육조직기인조DNA,가견비양성재체대적잡교조대.설명소검측적조직중이발생외원기인RFP적정합,단유사조직존재표체수평교저혹자불표체적현상.본실험분리도적β-actin기인계동자서렬구유유효적구동공능,가계동외원기인재당어체내적고효표체,종이위하일보진행공능기인적전화연구전정기출.
