生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
683-686
,共4页
叶小丽%吕茂民%颜奇坡%郭逸%吴健敏%田克恭%马玉媛%章金刚
葉小麗%呂茂民%顏奇坡%郭逸%吳健敏%田剋恭%馬玉媛%章金剛
협소려%려무민%안기파%곽일%오건민%전극공%마옥원%장금강
猪内源性反转录病毒%env基因%真核表达
豬內源性反轉錄病毒%env基因%真覈錶達
저내원성반전록병독%env기인%진핵표체
目的:构建猪内源性反转录病毒(PERV)囊膜基因env的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础.方法:用RT-PCR方法扩增五指山猪来源PERV的env基因,将其插入pGEM-T easy载体中,构建重组质粒pGEM-T-env,酶切鉴定正确后,将pGEM-T-env与pHCMV-VSV-G表达质粒同时经EcoR Ⅰ酶切消化后连接,构建重组表达质粒pHCMV-env,并进行酶切、测序鉴定；将鉴定正确的质粒pHCMV-env转染HEK293T细胞,采用PCR、RT-PCR检测转染后env基因的整合和转录情况.结果:扩增得到五指山猪来源PERV的env基因,并构建了pHCMV-env真核表达质粒,转染HEK293T细胞系后,该细胞系中有目的基因的整合和转录.结论:构建了真核表达质粒pHCMV-env,并且在HEK293T细胞中能够整合并转录,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定了基础.
目的:構建豬內源性反轉錄病毒(PERV)囊膜基因env的真覈錶達質粒pHCMV-env併加以鑒定,為研究PERV的細胞嗜性和宿主範圍奠定基礎.方法:用RT-PCR方法擴增五指山豬來源PERV的env基因,將其插入pGEM-T easy載體中,構建重組質粒pGEM-T-env,酶切鑒定正確後,將pGEM-T-env與pHCMV-VSV-G錶達質粒同時經EcoR Ⅰ酶切消化後連接,構建重組錶達質粒pHCMV-env,併進行酶切、測序鑒定；將鑒定正確的質粒pHCMV-env轉染HEK293T細胞,採用PCR、RT-PCR檢測轉染後env基因的整閤和轉錄情況.結果:擴增得到五指山豬來源PERV的env基因,併構建瞭pHCMV-env真覈錶達質粒,轉染HEK293T細胞繫後,該細胞繫中有目的基因的整閤和轉錄.結論:構建瞭真覈錶達質粒pHCMV-env,併且在HEK293T細胞中能夠整閤併轉錄,為研究PERV的細胞嗜性和宿主範圍奠定瞭基礎.
목적:구건저내원성반전록병독(PERV)낭막기인env적진핵표체질립pHCMV-env병가이감정,위연구PERV적세포기성화숙주범위전정기출.방법:용RT-PCR방법확증오지산저래원PERV적env기인,장기삽입pGEM-T easy재체중,구건중조질립pGEM-T-env,매절감정정학후,장pGEM-T-env여pHCMV-VSV-G표체질립동시경EcoR Ⅰ매절소화후련접,구건중조표체질립pHCMV-env,병진행매절、측서감정；장감정정학적질립pHCMV-env전염HEK293T세포,채용PCR、RT-PCR검측전염후env기인적정합화전록정황.결과:확증득도오지산저래원PERV적env기인,병구건료pHCMV-env진핵표체질립,전염HEK293T세포계후,해세포계중유목적기인적정합화전록.결론:구건료진핵표체질립pHCMV-env,병차재HEK293T세포중능구정합병전록,위연구PERV적세포기성화숙주범위전정료기출.
